Western及IP细胞裂解液

产品简介：

Ø         Western及IP细胞裂解液（Cell lysis buffer for Western and IP），是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀（immunol precipitation，IP）和免疫共沉淀（co-IP）。

Ø         Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris （pH7.5），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，βglycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

Ø         用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用森贝伽生物的BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S）测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

包装清单：

保存条件：

-20℃保存，一年有效。

注意事项：

Ø         为取得*的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

Ø         需自备PMSF。PMSF（ST506）可以向江莱订购。

Ø         裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

Ø         为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

对于培养细胞样品：

1.         融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。

2.         对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

3.         充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

对于组织样品：

1.         把*切成细小的碎片。

2.         融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。

3.         按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

4.         用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5.         充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6.         如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

附：森贝伽生物的各种裂解液主要特点、差异和选择

 首先请参考下表，了解各种裂解液的主要特点和差异。

Ø         用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液（P0013），该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。 

Ø         对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液（P0013）效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液（强、中或弱）或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液（强或中）。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液（弱）或NP-40裂解液。

Ø         对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液（P0013）效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液（强、中）或SDS裂解液。