福林酚试剂法测定蛋白质含量

一、原理：

    蛋白质与福林酚试剂反应，生成深蓝色复合物。蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照，而确定蛋白质含量。

二、试剂与材料：

    标准酪蛋白溶液（250ug/ml）：酪蛋白预先用微量凯氏定氮法测定纯度，再称量制备。也可用250ug/ml牛血清蛋白质标准溶液。

   福林酚试剂：吸取试剂A（0.2M氢氧化钠与4%*溶液等体积混合）100ml，加入试剂B（2%酒石酸钾钠溶液与1%五水硫酸铜等体积混合）2ml混合而成。

   福林酚试剂乙：吸取5ml*试剂加入5ml蒸馏水稀释而成。

   分光光度计、恒温水浴槽、蛋白质样品

三、操作方法:

1、标准曲线的制作：

    分别吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml标准溶液于小试管中，分别加进不同量的蒸馏水，补足到1ml。各加入5ml试剂甲，混匀后于室温下（25℃左右）放置10min。再加入0.5ml试剂乙，立即混匀，于室温下反应30min。于500nm波长下测定光密度。以吸光值作为纵坐标，蛋白质含量为横坐标绘制标准曲线。

2、样品蛋白质含量的测定

    取1ml样品溶液，加入5ml试剂甲，混匀，于25℃左右放置10min。再加入0.5ml试剂乙，立即摇匀，于25℃左右反应30min，测定吸光值，从标准曲线查出样品蛋白质含量。