美国Nalgene程序降温盒

细胞冻存有两种方法：传统的方法是利用冷存管处于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃，zui后再放置到液氮槽中长期保存。程序降温盒的使用注意事项如下：

美国Nalgene程序降温盒

实验室虽然有程序降温冻存盒，但怎么使用一直都搞不明白，我觉得是不是应该把程序降温冻存盒先从-80度移到室温放一段时间(细胞刚开始还没冻的时候就是室温)，然后把细胞放进去，再一起移到-80度，这样才能实现程序降温呢? 时间使用长了，感觉里面的液体是不是异丙醇啊，使用时间长了会不会挥发或变质什么的，要不要添加或维护一下呢，还有有一只降温盒因不小心给倾斜让液体流出了部分，要补充吗?

经验1：冻存盒外表面有刻度的吧，异丙醇液面要高于zui底线。4 a. C* D8 Y& P9 A, y

冻存盒肯定是先放在室温，然后放进去细胞，置于-80，利用异丙醇实现梯度降温啊。) ~0 O( O# Q* }: w# D" R' _

根据论坛里的讨论，异丙醇使用过一段时间后是要更换的，但是我一直没换过，也没发现很大问题。

经验2：我们实验室冻存盒平时放4度，需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮，贵重的细胞尽快转移，不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的，很方便，效果也不错的。

经验3：异丙醇的量是要保证的，不能低于表明的线，否则不能起到很好的程序性降温作用，我们是在4度放置，放了细胞后立马放到-80度冰箱，第二天再转移到液氮，效果很不错。异丙醇熔点：-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性有毒液体。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激数据：眼睛- 兔子100 毫克/ !请注意清理!

美国Nalgene程序降温盒

经验4：应该不可以把冻存盒放4°的，因为梯度降温的起始点是室温20°左右，所以从-80℃拿出来的冻存盒应该现在室温静置一段时间待其恢复到室温再使用。而其中的异丙醇应使用6~7此后更换一次，而且保证液体量达到刻度线，否则降温效果会受到影响。

经验5：冻存盒里的异丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理论上是5次以后更换异丙醇，但是异丙醇对环境有害，我们可以多用几次，只是少了的时候要加满。还有冻存液里面的DMSO对细胞有毒性，尤其是室温的时候，所以冻存盒和冻存液先放4°，等把细胞用冻存液重悬好了放在冻存盒里，还放回4°，等到出细胞间的时候再拿到-80°里面保存。过夜再转入液氮。

程序降温盒这个梯度降温可大大提高细胞冻存的存活率，由于程序降温盒内存在100%浓度的异丙醇和泡沫内衬，因此程序降温盒也可以用于细胞复苏。

1,remove high-density polyethylene tube holder and foam insert from polycarbonate unit .do not discard foam insert.
2,add 100% isopropyl alcohol to the fill line on the container. do not overfill.
3,carefully replace foam insert and tube holder.
4,place tubes containing sample into holes in tube holder.
5,place unit in bottom of -70°C to- 80°C mechanical freezer. leave undisturbed for a mininum of 4 hours.
6,remove frozen tubes from unit and place in a permanent,long-term storage freezer.
do not store full jar on its side. store at room temperature when not in use replace alcohol every fifth use. clean with non-abrasive,non-alkaline detergent such as .the tube holder floats with tubes in place an can be used as a floating rack when thawing samples.