Na~+-K~+-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒说明书

主要用途  

ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，机体在缺氧及等状态下，ATP酶受到损伤，活力下降。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。本测试盒可测钠钾—ATP酶、钙镁—ATP酶的活性。样品为各种组织及红细胞等，本法的zui大特点是样品前处理不需要高速离心机，方法简便、快速。

产品内容  

缓冲液（Reagent A）                      6毫升  

反应液（Reagent B）                      6毫升  

底物液（Reagent C）                      6 毫升

阴性液（Reagent D）                      6毫升

标准品（reagent E）                       6 微升 

产品说明书                                1 份  

保存方式  

保存反应液（Reagent B）和底物液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃  冰箱里；底物液（Reagent C）避免光照，有效保证 6 月   

用户自备  

1.5 毫升离心管：用于反应液配制的容器

微型台式离心机：用于样品制备   

比色皿或酶标板：用于比色的容器   

分光光度仪：用于比色分析  

酶标仪：用于微量样品比色分析  

实验步骤      

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent B）和底物液（Reagent C）  置入冰槽里融化。底物液（Reagent C）避免光照。然后进行下列操作。   

• 样品准备       

选择一：血浆样品   

1． 准备好 ACD 抗凝管（注意：避免使用肝素或 EDTA  抗凝管）  

2． 抽取 2 毫升血液，置于抗凝管里   

3． 放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 5000 g

4． 小心移取上层黄色液体到新的 1.5 毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）   

5． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存   

6． （选择步骤）移取50 微升进行蛋白定量测定

选择二：血清样品   

1． 准备好不含抗凝剂的储存管    

2． 抽取 2 毫升血液，置于储存管里  

3． 室温下，静置 30 分钟，直至血液凝结   

4． 放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 5000 g

5． 小心移取上层黄色液体到新的 1.5 毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）   

6． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存   

7． （选择步骤）移取 50 微升进行蛋白定量测定

选择三：组织样本

准确称取组织重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍的是PBS或者生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，去上清液待测。

二、 测定准备     

1. 准备好上述待测样品，置于冰槽里   

2. 设定好分光光度仪（温度为 37℃）：波长 440nm

三、样本测定

1． 在 96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照，标准品孔和样品孔   

2． 分别移取 50微升缓冲液（Reagent A）到相应孔中   

3． 设定标准品孔(加入50微升标准品），样本孔(加入50微升样本)阴性液孔(加入 50微升阴性液（Reagent D）

4． 分别加入50微升反应液（Reagent B）  

5． 轻轻摇动 96 孔酶标板   

6． 在 37℃温度下孵育 2 分钟   

7． 放进酶标仪，置零   

8． 取出酶标板，分别加入 50微升底物液（Reagent C）  

9． 轻轻摇动酶标板   

10．即刻放进酶标仪检测，包括（0 分钟初始读数和 5 分钟读数）   

四，样本计算

样本活性=样本OD值/标准OD值*标品浓度