一.*，要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的蛋白上样，才有比较的基础。特别是在表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以需要内参做对比。
内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，以保证实验结果的准确性。
在国外发表的文章中，Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是，国内仍有不少科研人员在Western Blotting实验中忽略了内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的*方法。然而各种蛋白质浓度定量方法，都存在局限性，不能*准确的确定各种样品的准确蛋白浓度。 蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样，此步骤也存在操作误差。在Western blotting实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否*、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。
实验结果分析其实很简单：如果样品蛋白量有限，只够进行一次电泳转膜实验时，分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果。如果样品量充分，可以先检测内参，观测样品间内参显色条带是否一致，根据差异大小调整各样品的上样量重新进行Western Blotting实验，至内参量一致为止；若内参一致，即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。这样虽然麻烦一点，但是可以保证结果更有说服力，更可信。毕竟我们的实验是一种严谨的工作。
二.实验中出现的问题及处理办法
1、为什么带出现拖尾现象？
原因：主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的；
处理办法：加样前离心，选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制;降低凝胶浓度。
2、为什么带出现纹理现象？
原因：主要是样品不溶性颗粒引起的；
处理办法：加样前离心，加适量样品促溶剂。
3、为什么电泳的条带很粗？
原因：电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩好的原因；
处理办法：适当增加浓缩胶的长度，保证浓缩胶贮液的pH正确（6.7），适当降低电压。