无机磷检测试剂盒(紫外分光光度比色法) 简介

血清中的无机磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-两种磷酸根阴离子 组成，上述阴离子在在丌同的 pH 环境下能快速相互转换。在 pH7.4 血清中，二者浓度比 例为1:4；在酸中毒环境下二者浓度约为1:1；在碱中毒环境下二者浓度比例为1:9；在 pH4.5 尿液中浓度比例为 100:1。WHO*的常规检测方法为比色法，我国卫生部临检中心* 的常规方法为*钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法，亦可采用紫外分光光度法。           

无机磷检测试剂盒(紫外分光光度比色法)无需处理样本，利用无机磷不钼酸铵 结合生成磷钼酸铵，通过分光光度计直接检测 325～340nm 处吸光度，根据公式计算出无 机磷含量。紫外分光光度法优点在于：操作简单、快速、稳定；缺点在于：易受溶血、黄疸、 脂血的干扰。该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断戒其他用途。  

操作步骤(仅供参考)：

 1、 (选做)制备样品：

① 浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃ 冻存，用于 Pi 的检测。

②细胞戒组织样品：取恰当细胞戒组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于 Pi 的检测。

试剂(A): 磷标准(1mg/ml) 1ml 4℃  

试剂(B): 磷标准稀释液 2ml RT   

试剂(C): Pi Assay buffer  100ml RT  

试剂(D): 钼酸铵显色液 100ml 4℃ 避光

试剂(E): ddH2O 2ml RT

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ƒ高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的 Pi，可以使用 ddH2O稀释，丌宜使用普通蒸 馏水稀释。   ④(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计     算单位蛋白重量组织戒细胞内的 Pi 含量。 2、 制备磷标准工作液：取适量的磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：磷标准稀释液=1： 24 的比例稀释，即获得磷标准(1.292mmol/L)。4℃保存，用于 Pi 的检测。 3、 制备 Pi 显色工作液：取适量的Pi Assay buffer 和钼酸铵显色液，等量混合，24h 内使 用。 4、 Pi 检测：按下表操作。       

5、 混匀，室温静置 5min，分光光度计 340nm 处检测，比色杯光径 1.0cm，以空白管调 零，读取各管吸光度值。一般应 2h 内检测完毕。  

计算：血清、血浆中无机磷计算公式：磷(mmol/L)=( A 测定/ A 标准)×1.292      

尿液中无机磷计算公式：磷(mmol/d)=( A 测定/ A 标准)×1.292×N×24h 尿量(L)      

组织中磷计算公式：磷(mmol/mg)=( A 测定/ A 标准)×1.292/待测样品蛋白浓度(mg/L) 式中： A 测定=待测管的吸光度值  A 标准=标准管的吸光度值  N=尿液稀释倍数 单位换算：mg/dl=mmol/L/0.323

健康成年人血清磷浓度：0.9～1.34mmol/L(2.76～4.16mg/dl)  

1、 本法应在 5min～2h 内检测。3h 后标准管吸光度无变化，测定管吸光度随着时间的延 长而上升。

2、 溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。

3、 黄疸和脂血样本应做标本空白。

加入物( ml) 空白管 标准管 测定管 ddH2O 0.07 — — 磷标准工作液(1.292mmol/L) — 0.07 — 待测样品  — 0.07 Pi 显色工作液 2.0 2.0 2.0

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4、 本法能够用于自动生化分析仪终点检测法。

5、 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数

6、 本法线性范围为 0.33～3.88mmol/L。  

有效期： 12 个月有效。