南京森贝伽免疫细胞化学技术为您分享啦！

将已经消毒的盖玻片置于6孔培养板中，按104-105/ml的细胞密度将细胞接种于培养板中进行细胞爬片，培养6-12小时，待细胞贴壁后，3-5天后进行免疫细胞组织化学染色鉴定。PBS清洗时将玻片置于小培养皿中。

步骤如下：

1. PBS清洗标本3次各1min。

2. 95%酒精（冰丙酮等其他固定剂）固定15min。

3. 空气干燥5min。

4. PBS清洗标本3次各1min。

5. 0.5%Triton X-100（DPBS配）孵育1次20min。

6. PBS清洗标本3次各1min。

7. 3%H2O2孵育15min。

8. DPBS清洗标本3次各2min封闭血清孵育（5%正常二抗血清DPBS液）20min。

9. 一抗孵育（PBS配，湿盒）4℃过或37℃，60min。阴性对照用一抗来源血清，否则用PBS液。

10. PBS清洗标本3次各1min。

11. 二抗孵育（湿盒）37℃，30min。

12. PBS清洗标本3次各1min。

13. C液（*抗*蛋白-过氧化酶，湿盒）37℃，30min。

14. PBS清洗标本3次各5min。

15. DAB显色（避光，镜下观察至棕色）约3~10min。

16. 蒸馏水洗2次1min。

17. 苏木素复染0.5~1min。

18. 自来水洗10min左右。

19. 95%乙醇脱水1~2s，树胶封片。

注意：

1、 冲洗时只须轻轻振荡培养皿（不可用吸管太用力吹，易脱片）；

2、 加一抗、二抗后冲洗时*次须将玻璃片倾斜。

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*

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