Ⅰ  新产品名称，目录编号及内容物

Ⅱ  新产品描述

应市场需求，我公司与美国哥伦比亚生物公司合作，并以美国哥伦比亚生物公司发明的一步法快速免疫检测技术平台为基础开发生产两种*的快速而简易的一步法三聚氰胺快速检测试剂产品，该产品以20分钟的一次性反应取代耗时与繁琐的常规步骤（其整个过程一般需7至24小时多达10个步骤：抗体包埋 （2～12小时），封闭（2～3小时），样品结合 （1～2小时），洗涤（5～15 分钟），*抗体结合（2～3 小时），洗涤（5～15 分钟），第二抗体结合（1～2小时），洗涤（5～15 分钟），显色（5～20 分钟），读盘（1分钟）），从而使得检测过程简单化和快速化。使用现场用一步法三聚氰胺定性快速检测试剂盒的用户无需设备和专业技能就可进行检测；而使用实验室用一步法三聚氰胺定量快速检测试剂盒的用户即可进行无需设备的初步定量检测，也可使用简单的ELISA读盘机进行简单的专业技术检测。

Ⅲ  应用

• 现场一步法三聚氰胺定性快速检测试纸条主要用于：

现场定性检测三聚氰胺，无需设备，例如牛奶现场检测，家庭用户检测奶制品及饲料是否含有三聚氰胺等。

• 实验室用一步法三聚氰胺定量ELISA快速检测试剂盒主要用于：

定量检测三聚氰胺的含量，可使用设备或不使用设备均可进行定量检测，而这区别仅在于定量的精度不同，非常方便技术监督、检验检疫部门进行产品质量检测，对于没有设备的区县级监督检验机构可运用无需设备的初步定量检测。

Ⅳ  特点：

⑴简便：简单的一步法反应  （常规方法需6步以上：抗体包埋，封闭，样品结合，洗涤，*抗体结合，洗涤，第二抗体结合，洗涤，显色，读盘）；

⑵快速：样品检测时间为20分钟左右；

⑶准确：检测准确，检测限—快速检测试剂条<2 mg/kg （L）, ELISA试剂盒小于0.1 mg/kg （L）,   重现性好；

⑷方便：一步法三聚氰胺定量快速检测ELISA试剂盒用户，初步定量检测无需设备就可进行检测；

⑸价廉：本一步法产品费用低廉。

Ⅴ  贮藏

试剂盒里的各种试剂可贮存于（2-8 °C）冷藏柜，于盒上标注日期前用完。

Ⅵ试验设计

1.检测原理

本试剂盒采用免疫竞争法检测三聚氰胺。微量反应板上包被有抗三聚氰胺抗体。反应后，加入三聚氰胺酶结合物和三聚氰胺标准品或样品，游离三聚氰胺与三聚氰胺酶结合物竞争微量反应板上的抗三聚氰胺抗体，没有结合的酶结合物被洗去。再向反应孔中加入相应反应底物，作用一定时间后，结合的酶结合物将底物转化为蓝色的产物，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，读取各孔OD值。就可计算出样品中的三聚氰胺浓度。

2.提供的试剂

⑴ 用铝箔袋真空包装的96孔板 （12×8条），内含指示干燥剂

⑵ 浓度分别为 0µg/L, 20µg/L, 50µg/L, 100µg/L,200µg/L, 500 µg/L 的5瓶三聚氰胺标准液

⑶ 1瓶 稀释液

⑷ 1 瓶 三聚氰胺HRP酶标记物.

⑸ 1 瓶 底物.

⑹ 1 瓶 停止液.  （注意! 1N 盐酸. 勿接触皮肤.）

3.额外所需物品（未包含在该试剂盒中）

⑴ 带450 nm滤光片的酶标仪（根据检测精度要求可选择是否使用），计时器

⑵ 20 mM PBS： 0.62g NaH₂PO₄-2H₂O+5.73gNa₂HPO₄-12H₂O+9gNaCl  蒸馏水定容至1000ml

4. 样品预处理

• 固体样品

⑴ 潮饲料的提取方法：稀释系数：100

① 用搅拌机均质样品直至呈糊状

② 用10 mL 60% MeOH/水萃取2 g样品并剧烈涡旋振荡

③ 超声裂解样品1 min

④ 再次涡旋振荡样品1 min。静置5 min使其分层

⑤ 10000 rpm离心10min

⑥ 用G6玻璃滤纸过滤清澈的上层相，然后用干净的瓶子储存提取液

⑦ 用样品稀释液将清澈的提取液稀释20倍（0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）

⑧ 此稀释的样品可直接用于试验

回收率介于75-117%

⑵ 干饲料的提取方法：稀释系数：200

① 用搅拌机均质干猫粮样品

② 称取1 g均质样品，加10 mL 60% 甲醇/水

③ 剧烈涡旋振荡后超声裂解样品1min。再次振荡1min后静置5min

④ 10000 rpm离心10min

⑤ 用G6玻璃滤纸过滤清澈的上层相，然后用干净的瓶子储存提取液

⑥ 用样品稀释液将清澈的提取液稀释20倍（0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）

⑦ 此稀释的样品可直接用于试验

• 液体样品

① 取液体样品，用稀释液稀释，根据液体样品的不同随产品提供相应稀释浓度的说明。

5.步骤（注意: 标准及样品做平行试验以增加准确度.）

⑴ 将所有试剂及样品置于室温下，用实验室级的水充满洗瓶

⑵ 从铝箔袋中取出相应数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮

⑶ 吸取100ul标样或稀释的样品提取液到相应的微孔。每个样品使用一个新的吸头。每孔加50ul三聚氰胺HRP酶标记物

⑷ 轻轻混合30秒，孵育30分钟

⑸ 孵育完后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用洗液*充满微孔，震荡后倒掉，重复三次，总共洗板四次

⑹ 在吸水纸上拍打，尽可能将水拍干

⑺ 每孔加入100ul底物溶液

⑻ 孵育20分钟

⑼ 每孔加入100ul终止液

⑽ 用酶标仪读取450nm下的吸光值