试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：                                                          96T

0.6μg/L -16μg/L

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中25羟基*3（25（OH）D3）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人25羟基*3（25（OH）D3）水平。用纯化的人25羟基*3（25（OH）D3）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入25羟基*3（25（OH）D3），再与HRP标记的25羟基*3（25（OH）D3）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的25羟基*3（25（OH）D3）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人25羟基*3（25（OH）D3）浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品（32μg/L）

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张 

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

16μg/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

8μg/L

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

4μg/L

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

2μg/L

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

1μg/L

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

公司相关产品：

小鼠粘蛋白/粘液素7（MUC7）ELISA试剂盒  Mouse Mucin-7,MUC7 ELISA试剂盒
小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）ELISA试剂盒  Mouse eosinophil cationic protein,ECP ELISA试剂盒 
小鼠Qa淋巴细胞抗原2（Qa-2）ELISA试剂盒  Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2 ELISA试剂盒
小鼠D-乳酸脱氢酶（D-LDH）ELISA试剂盒  Mouse D-Lactate Dehydrogenase,D-LDH ELISA试剂盒 
小鼠孕酮受体（PROGR）ELISA试剂盒  Rat Progesterone receptor,PROGR ELISA试剂盒
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）ELISA试剂盒  Mouse Insulin-like growth factor binding protein 6,IGFBP-6 ELISA试剂盒 
小鼠肺部活化调节趋化因子（PARC/CCL18）ELISA试剂盒  Mouse pulmonary activation regulated chemokine,PARC ELISA试剂盒
小鼠*（LZM）ELISA试剂盒  Mouse Lysozyme,LZM ELISA试剂盒 
小鼠β连环蛋白/联蛋白（β-Cat）ELISA试剂盒  Mouse β-catenin,β-cat ELISA试剂盒
小鼠骨退化特异标志物（CTX-2）ELISA试剂盒  Mouse CTX-2 ELISA试剂盒
小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）ELISA试剂盒  Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA试剂盒 
小鼠血管紧张素转化酶（ACE）ELISA试剂盒  Mouse Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA试剂盒
小鼠血管紧张素Ⅱ（ANG-Ⅱ）ELISA试剂盒  Mouse angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA试剂盒
小鼠角化细胞内分泌因子（KAF）/双调蛋白（AR）ELISA试剂盒  Mouse keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA试剂盒
小鼠活化素A（ACV-A）ELISA试剂盒  Mouse Activin A,ACV-A ELISA试剂盒
小鼠脑源性神经营养因子（BDNF）ELISA试剂盒  Mouse Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA试剂盒
小鼠骨成型蛋白2（BMP-2）ELISA试剂盒  Mouse Bone morphogenetic protein 2,BMP-2 ELISA试剂盒
小鼠骨成型蛋白4（BMP-4）ELISA试剂盒  Mouse Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA试剂盒
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）ELISA试剂盒  Mouse Insulin-like growth factor binding protein 6,IGFBP-6 ELISA试剂盒 
小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ（MIP-1δ/CCL15）ELISA试剂盒  Mouse Macrophage Inflammatory Protein 1δ,MIP-1δ ELISA试剂盒 
小鼠肺部活化调节趋化因子（PARC/CCL18）ELISA试剂盒  Mouse pulmonary activation regulated chemokine,PARC ELISA试剂盒
小鼠*（LZM）ELISA试剂盒  Mouse Lysozyme,LZM ELISA试剂盒 
小鼠可溶性CD30（sCD30）ELISA试剂盒  Mouse soluble cluster of differentiation 30,sCD30 ELISA试剂盒
小鼠可溶性肌球蛋白重链2（sMHC-2）ELISA试剂盒  Mouse soluble myosin heavy chain 2,sMHC-2 ELISA试剂盒
小鼠可溶性肌球蛋白重链1（sMHC-1）ELISA试剂盒  Mouse soluble myosin heavy chain 1,sMHC-1 ELISA试剂盒
小鼠粘蛋白/粘液素C（MUCC） ELISA试剂盒  Mouse Mucin-5 subtype AC,MUCC ELISA试剂盒
小鼠血管紧张素转化酶（ACE）ELISA试剂盒 Mouse Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA试剂盒
小鼠血管紧张素Ⅱ（ANG-Ⅱ）ELISA试剂盒 Mouse angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA试剂盒
小鼠角化细胞内分泌因子（KAF）/双调蛋白（AR）ELISA试剂盒 Mouse keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA试剂盒
小鼠活化素A（ACV-A）ELISA试剂盒 Mouse Activin A,ACV-A ELISA试剂盒
小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPO-Ab）ELISA试剂盒  Mouse anti-Thyroid-Peroxidase antibody,TPO-Ab ELISA试剂盒 
小鼠脑源性神经营养因子（BDNF）ELISA试剂盒 Mouse Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA试剂盒
小鼠凋亡诱导因子（AIF）ELISA试剂盒  Mouse apoptosis inducing factor,AIF ELISA试剂盒 
小鼠骨成型蛋白2（BMP-2）ELISA试剂盒 Mouse Bone morphogenetic protein 2,BMP-2 ELISA试剂盒
小鼠骨成型蛋白4（BMP-4）ELISA试剂盒 Mouse Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA试剂盒
小鼠骨成型蛋白受体1A（BMPR-1A）ELISA试剂盒 Mouse Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA试剂盒
小鼠碱性磷酸酶（ALP）ELISA试剂盒  Mouse alkaline phosphatase,ALP ELISA试剂盒
小鼠血管生成素4（ANG-4）ELISA试剂盒  Mouse Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA试剂盒
小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ（BMPR-Ⅱ）ELISA试剂盒 Mouse Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA试剂盒
小鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类（MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ）ELISA试剂盒 Mouse major histocompatibility complex-Ⅲ,MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA试剂盒
小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白（E-Cad）ELISA试剂盒 Mouse E-Cadherin,E-Cad ELISA试剂盒
小鼠CD30分子（CD30）ELISA试剂盒 Mouse Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA试剂盒
小鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA试剂盒  Mouse major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ ELISA试剂盒
小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体（sEPCR）ELISA试剂盒 Mouse soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA试剂盒
小鼠嗜酸粒细胞趋化因子（ECF）ELISA试剂盒 Mouse eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA试剂盒
小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1（Eotaxin 1/CCL11）ELISA试剂盒 Mouse Eotaxin 1 ELISA试剂盒
小鼠红细胞生成素（EPO）ELISA试剂盒 Mouse Erythropoietin,EPO ELISA试剂盒
小鼠E选择素（E-Selectin/CD62E）ELISA试剂盒  Mouse E-Selectin ELISA试剂盒