小鼠氧化低密度脂蛋白抗体（OLAb）酶联免疫分析试剂盒​双抗体夹心法

小鼠氧化低密度脂蛋白抗体（OLAb）酶联免疫分析试剂盒双抗体夹心法(检测未知抗原):1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。

2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

标本的采集及保存

1.血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x 离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆: 将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在20 mL PBS中于-20° C放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000x g离心5分钟,取上清即可检测。

4.细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。