皮肤基底细胞癌细胞的操作步骤主要包括以下几个方面:
细胞复苏:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度2。
细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中2。
细胞冻存:细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次。添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min。用适量的冻存液重悬细胞,并放置于冻存管中。先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h,然后将其移入-80℃2。
以上就是皮肤基底细胞癌细胞的基本操作步骤。需要注意的是,这些操作应在无菌条件下进行,以避免污染。