蛋白胨细胞培养基基本配方构成及血清在其中的地位

蛋白胨细胞培养基基本配方构成及血清在其中的地位

无血清蛋白胨培养基的基本配方：基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。

　　用于生物制药和疫苗的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。

　　添加组分包括以下几大类物质

　　()促贴壁物质：许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞培养基包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。

　　(2)促生长因子及激素：针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞*的，如胰岛素。

　　(3)酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用消化传代，在无血清培养基中*须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。zui常用的是大豆；抑制剂。

　　(4)结合蛋白胨和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。

　　(5)微量元素：硒是zui常见的。

    目前，血清仍是动物蛋白胨细胞培养中zui基本的的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，从0%减少到5%，3%，%，直至无血清培养。

　　在降低过程中要注意观察细胞培养基形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留，很少有细胞能够培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。

　　为了使细胞适应无血清培养，关键的是使所培养细胞：、处于对数生长中期，2、大于90% 活细胞率，3、适应时以较高的起始细胞接种。