培养基介绍细胞复苏需要注意的事项

培养基介绍细胞复苏需要注意的事项

　　. 培养基取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。

　　2. 冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是*无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在-2min内使冻存液*融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）选择进口产品。

　　3. 离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。

　　4. 离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞培养基悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。

　　5. 细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时ml细胞液要加0ml－5m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。

　　6. 复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏管细胞一般可分装到-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。

　　7. 加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是％。所以如果你的冻存液的浓度是0％DMSO的话那么加0ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。