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兔一氧化氮(NO)ELISA试剂盒实验步骤说明

时间:2014/9/23阅读:628
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兔一氧化氮(NO)ELISA试剂盒实验步骤说明

.标准品的稀释:兔一氧化氮(NO)ELISA试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40μmol/L

5号标准品

50μl的原倍标准品加入50μl标准品稀释液

20μmol/L

4号标准品

50μl5号标准品加入50μl标准品稀释液

0μmol/L

3号标准品

50μl4号标准品加入50μl标准品稀释液

5μmol/L

2号标准品

50μl3号标准品加入50μl标准品稀释液

2.5μmol/L

号标准品

50μl2号标准品加入50μl标准品稀释液

2.加样:兔一氧化氮(NO)ELISA试剂盒分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品0μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。  

4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:兔一氧化氮(NO)ELISA试剂盒每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3

8.洗涤:操作同5

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色5分钟.

0.终止:兔一氧化氮(NO)ELISA试剂盒每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。

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