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杂交反应是指用杂交液孵育组织切片，杂交液中标记的核酸探针在适当的条件下与组织细胞内相应的靶核酸互补结合形成杂交体的过程。杂交液的成分与预杂交液基本相同，所不同的只是加入标记的核酸探针。ELISA试剂盒
杂交前的准备只是为杂交成功奠定基础．要获得满意的实验结果，在杂交 反应的实验过程中还必须注意以下环节。
双链DNA探针和靶DNA变性
进行杂交反应时．探针和靶核酸必须均是单链，两者方能结合。如果探针和靶核酸均为双链或二者中有一者是双链。必须通过变性使其变为单链。一般通过加热变性。变性温度为95C，5～5分钟。探针和(或)靶核酸一旦变性，则需立即进行杂交反应，否则解链的核酸又会重新复性。如果用单链探针检测靶RNA，一般不需要变性。有时单链探针较长，可能会在局部形成双链，这时也同样可通过加热处理使局部双链解开以利于探针和靶核酸之间的结合。ELISA试剂盒
微波炉处理也可使双链DNA探针和靶DNA变性。此法不仅能使双链探针和靶核酸有效地变性，而且还能使杂交信号增加。这可能是由于微波辐射引起基质蛋白质变性，使靶核酸暴露，也可能是微波辐射对靶核酸构型产生直接影响，从而提高杂交效率。ELISA试剂盒
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