血清脂蛋白的实验操作

    原理:将血清脂蛋白用脂类染料（如苏丹黑或油红O等）进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后，脂蛋白向正极移动，并分离为几个区带。

操作:

．预染血清：血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中，混合后置37℃水浴染色30分钟，然后离心（2000转/分，约5分钟）。

2．制备琼脂糖凝胶板：将已配制的0.45%琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管吸取凝胶溶液浇注载玻片，每片2.5ml，静置约半小时后凝固（天热时需延长，可放冰箱数分钟加速凝固）。

3．点加血清：已凝固的琼脂糖凝胶板的一端约2cm处，用切口刀片垂直切入凝胶后立即取出，然后用铜丝小匙将长方小条凝胶取出。以小片滤纸吸干小槽中水分，用血色素吸管吸取经过预染的血清约5μl，注入凝胶板上的小槽内。

4．电泳：将加过血清的凝胶板平行放入电泳槽中，样品应在阴极一端。两块三层纱布于缓冲液中浸润，然后轻轻紧密贴在凝胶板两端，纱布的另一端浸于电泳槽内的缓冲液（注意：此电极缓冲液不能用三羟甲烷缓冲液代替）。接通电源，电压为20~30V，每片电流为3~4mA。约经电泳5至55分钟，即可见分离之色带。

结果及临床意义:

．正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从负极到正极依次为β-脂蛋白（zui深）、前β-脂蛋白（zui浅）、α-脂蛋白（比前β-脂蛋白略深些），在原点处应无乳糜微粒。

2．如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深，结合血清甘油三酯明显升高和正常或略高，可以定为Ⅳ型高脂蛋白血症。

3．如果β-脂蛋白区带比正常血清明显深染者，同时结合血清总明显增高、甘油三酯正常者为Ⅱa型；若结合血清总增高而甘油三酯略高的前β略溶者为Ⅱb型。

4．结果β-和前β-两区带分离不开连在一起称“宽β区带"，结合血清甘油三酯和均有所增高，可定为Ⅲ型。

5．如果原点出现乳糜微粒，β，前β均正常或减低，结合血清甘油三酯明显升高，可定为Ⅰ型。

注意事项:

．电泳样品要求为新鲜的空腹血清。

2．每一块凝胶上可平行挖两条小槽，因而可加两个样品。

3．如果用一形状大小和小槽一样的有机玻璃片，在琼脂糖胶凝固前固定于适当位子上，当凝固后取出有机玻璃片，凝胶板上留下小槽可直接加样，不需挖槽。

4．如果需要保留电泳样本，可将电泳后之凝胶板（连同玻片）放于清水中浸泡脱盐2小时，然后放烘箱（80℃左右）烘干即可。蛋白