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流式细胞术方案

时间:2015/12/2阅读:678
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A.所需溶液和试剂

    X磷酸盐缓冲液(PBS):将8 g氯化钠(NaCl),0.2 g 氯化钾(KCl),.44 g (Na2HPO4),0.24 g 磷酸二氢钾(KH2PO4)溶解在800 ml蒸馏水(dH2O)中。用盐酸调节pH到7.4,定容至升。室温保存。细胞

    (无甲醇的)

    孵育缓冲液:将0.5 g牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)溶解在00 ml的 X PBS中。保存在4°C。

B. 固定

    离心收集细胞,弃上清。
    将细胞重悬在0.5- ml PBS中。加入至终浓度为2-4%。
    37°C固定0分钟。
    放在冰上降温分钟。
    做细胞外染色不需要细胞膜打孔时,继续D步或将细胞保存在4°C含有0.%叠氮钠的PBS中;做细胞内染色时,继续C步给细胞膜打孔。

C.细胞膜打孔

    边轻轻震荡边将冰冷的00%甲醇缓慢加入到预冷的细胞中,至终浓度为90%。或者也可以在细胞膜打孔前离心去除固定剂,然后将细胞沉淀重悬在90%甲醇PBS溶液中。
    在冰上放置30分钟。
    进入染色步骤或是将细胞在90%甲醇PBS溶液中,-20°C保存。

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