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残留elisa试剂盒实验操作流程

时间:2020/5/7阅读:787
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残留elisa试剂盒操作流程如下:

()待测样品孔中每孔加入待测样品00μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液00μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液00μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 00μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(0)每孔加TMB显色液 00μl,轻轻混匀0s,置37℃暗处反应5-20min。
()每孔加00μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(2)分别测450nm 吸光值W和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(3)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.为阳性判定标准。

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