南非诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤

南非诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤：

方法

：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

0×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物（0pM）                 

2 μl     引物2（0pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

μl     DNA模板（50ng-μg/μl）  

μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用00μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-0μl电泳检测。

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