人核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)免疫组化试剂盒​实验步骤

人核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)免疫组化试剂盒实验步骤（建议方案）：

石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度

.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤 hr；

2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次

0 min；

3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%

乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；

4.抗原修复： 根据抗体说明书方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温

度达到98~00℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×

2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附）* 注：有些抗原勿需修复，

直接进入第5 步封闭。

5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；

6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；

7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育0 min；

9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育

30 min；

0.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；

2.加HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂E（：50~200，终浓度5~20 nM），

37℃湿盒中孵育30 min；

3.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；

4.显色：应用DAB 溶液（试剂F）显色；

5.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；

6.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；

7.观察成像： 显微镜下观察成像。