植物钙调素（CaM）ELISA试剂盒组成说明书

植物钙调素（CaM）ELISA试剂盒实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物钙调素（CaM）水平。用纯化的植物钙调素（CaM）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物钙调素（CaM）抗原，再与HRP标记的植物钙调素（CaM）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物钙调素（CaM）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物钙调素（CaM）活性浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成    48孔配置    96孔配置    保存
说明书    份    份     
封板膜    2片（48）    2片（96）     
密封袋    个    个     
酶标包被板    ×48    ×96    2-8℃保存
标准品：720U/L    0.5ml×瓶    0.5ml×瓶    2-8℃保存
标准品稀释液    .5ml×瓶    .5ml×瓶    2-8℃保存
酶标试剂    3 ml×瓶    6 ml×瓶    2-8℃保存
样品稀释液    3 ml×瓶    6 ml×瓶    2-8℃保存
显色剂A液    3 ml×瓶    6 ml×瓶    2-8℃保存
显色剂B液    3 ml×瓶    6 ml×瓶    2-8℃保存
终止液    3ml×瓶    6ml×瓶    2-8℃保存
20倍浓缩洗涤液    20ml×瓶    23ml×瓶    2-8℃保存
标本要求： 
．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
植物钙调素（CaM）ELISA试剂盒操作步骤：
. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔0孔，在、第二孔中分别加标准品00μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取00μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为480 U/L，320 U/L ，60 U/L，80U/L， 40 U/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5分钟. 
0. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。
 
注意事项：
． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
0. 如与英文说明书有异，以植物钙调素（CaM）ELISA试剂盒英文说明书为准。