鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒说明书

鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒使用目的：
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。用纯化的鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度。
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标本要求 
．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
、鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
64ng/L
5号标准品
50μl的原倍标准品加入50μl标准品稀释液
32ng/L
4号标准品
50μl的5号标准品加入50μl标准品稀释液
6ng/L
3号标准品
50μl的4号标准品加入50μl标准品稀释液
8ng/L
2号标准品
50μl的3号标准品加入50μl标准品稀释液
4ng/L
号标准品
50μl的2号标准品加入50μl标准品稀释液
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：操作同3。
8、洗涤：操作同5。
9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5分钟.
0、鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。