大提柱式土壤DNAout

大提柱式土壤DNAout
产品及特点
本产品是在本公司柱式土壤DNAOUT（CAT：7205-50）基础上开发而
得的大提升级产品，用于从各种土壤样品和河海沉积物中大量提取高质量的
DNA的试剂。跟柱式土壤DNAOUT相比它具有下列特点：
. 处理量大，一次zui多可以处理20克的土壤样品。
2. 去污染效果更好，得到的DNA可以直接作为PCR模板或酶切，不需要
再进行去腐殖酸处理。
3. 操作过程更加简单快速，整个操作只需要0多分钟，扩容性好。
4. 产量高，每克土壤一般可以提取到5-50 ug DNA，片段长度在20-50 Kb，
OD260/280一般都在.8以上。
5. 适合于各种土壤（包括河海沉积物）。
规格及成分
成 份 4次包装（80928）
溶液A 50 mL
溶液B 50 mL
溶液C 00 mL
离心吸附柱 4套
通用洗柱液 00 mL
通用洗脱液 0 mL
使用手册 份

运输及保存 常温运输，4℃保存，保存期为一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法
. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0 mL加入到.5 mL
塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取3-20 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震
荡5-0分钟。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 5000-7000 rpm室温离心3-5分钟，将上清转移到一新离心管中（上清
液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积
一般为6-8 mL）。
5. 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白
色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 5000-7000 rpm室温离心3-5分钟，转移上清到新的50 mL离心管中，
上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积在4 mL左右。
注意：下面第8-第9步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第0步，但DNA
的产量会低50%左右，OD260/280在.7-.8。
8. 加入4 mL的氯仿（自备），震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让
管底的溶液震荡起来。
9. 5000-7000 rpm室温离心3-5分钟，小心转移上清到新离心管中，体积
在 mL左右。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相
部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。
0. 加入.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀。
. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，5000-7000 rpm
室温离心分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，
5000-7000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液）。
2. 加0 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，5000-7000 rpm室温离心分
钟，弃穿透液。
3. 重复上个步骤一次。
4. 5000-7000 rpm室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗
柱液会污染DNA。
5. 将离心吸附柱转移到一新的50 mL塑料离心管中，加入 mL 通用洗脱
液。
6. 室温放置离心吸附柱-2分钟。
7. 5000-7000 rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品。