ELISA试剂盒试验原理:
P-selectin试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知P-selectin浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将P-selectin和标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中P-selectin的浓度呈比例关系。
ELISA试剂盒内容及其配制
试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶标板块板(96T)半块板(48T)即用型
塑料膜板盖块半块即用型
标准品:400pg/ml瓶(0.6ml)瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀
空转移趋化生长因子β对照瓶(.0ml)瓶(0.5ml)即用型
标准品稀释缓冲液瓶(5ml)瓶(2.5ml)即用型
标记的抗P-selectin抗体瓶(6ml)瓶(3.0ml)即用型
亲和链酶素-HRP瓶(0ml)瓶(5.0ml)即用型
洗涤缓冲液瓶(20ml)瓶(0ml)按说明书进行稀释
底物A瓶(6.0ml)瓶(3.0ml)即用型
底物B瓶(6.0ml)瓶(3.0ml)即用型
终止液瓶(6.0ml)瓶(3.0ml)即用型
标本稀释液瓶(2ml)瓶(6.0ml)即用型
自备材料
蒸馏水。
加样器:5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
ELISA试剂盒安全性
避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。