小鼠促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）试剂盒简介

　　小鼠促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）试剂盒简介
　　
　　检测范围：0ng/L-400ng/L
　　
　　本试剂盒仅供科研使用
　　
　　实验原理
　　
　　小鼠促肾上腺皮质激素释放因子CRF应用双抗体夹心法测定标本中小鼠促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）水平。用纯化的小鼠促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小鼠促肾上腺皮质激素释放因子（CRF），再与HRP标记的促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）浓度。
　　
　　操作步骤
　　
　　.标准品的稀释：小鼠促肾上腺皮质激素释放因子CRF提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
　　
　　400ng/L5号标准品50μl的原倍标准品加入50μl标准品稀释液
　　
　　200ng/L4号标准品50μl的5号标准品加入50μl标准品稀释液
　　
　　00ng/L3号标准品50μl的4号标准品加入50μl标准品稀释液
　　
　　50ng/L2号标准品50μl的3号标准品加入50μl标准品稀释液
　　
　　25ng/L号标准品50μl的2号标准品加入50μl标准品稀释液
　　
　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
　　
　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
　　
　　4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
　　
　　5.洗涤：小鼠促肾上腺皮质激素释放因子CRF小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
　　
　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
　　
　　7.温育：操作同3。
　　
　　8.洗涤：操作同5。
　　
　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5分钟.
　　
　　0.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
　　
　　.测定：小鼠促肾上腺皮质激素释放因子CRF以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后5分钟以内进行。