国产ELISA试剂盒实验检测方案

国产ELISA试剂盒双抗体夹心法
    .测抗原
      ① 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
      ② 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
      ③ 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
      ④ 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。 
    2.测抗体
    反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。

间接法测抗体
    原理：为利用酶标记的抗抗体(抗抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。
    操作步骤：
    .将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。
    2.加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
    3.加酶标抗抗体，可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
    4.加底物显色本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。
    优点评估：只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。国产ELISA试剂盒间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。

 衰变加速因子CD55IgG 人cAMP反应元件结合蛋白(CREB)

 衰老标记蛋白30IgG 人C4结合蛋白(C4BP)

 双甲基水解酶2IgG 人B受体(BCR) 

 双链RNA腺苷酸脱氨基酶（N端）IgG 人B生长因子(BCGF) 

 双链RNA腺苷酸脱氨基酶IgG 人B-淋巴趋化因子(BLC-/CXCL3) 

 双皮质素IgG 人B淋巴瘤因子3(Bcl3)

 双调蛋白（大肠直肠细胞源性生长因子）IgG 人B因子(BF) 
国产ELISA试剂盒