小鼠卵泡膜细胞 返回列表页

小鼠卵泡膜分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。哺乳动物的卵巢内卵泡的发育需要相关激素的调节才能完成，垂体促性腺激（卵泡刺激素和黄体生成素）使原始卵泡开始发育，其过程中还产生大量的雌激素。雌激素是卵巢的颗粒细胞和卵泡膜细胞在垂体促性腺激的作用下协同合成的，卵泡膜细胞合成的雄激素透过基膜进入颗粒细胞，并转变为雌激素。因此，卵泡膜细胞在生殖内分泌调节中占有关键的位置，了解其在病理及生理中的作用，对于与性激素有关的妇产科疾病（如多囊卵巢综合症、卵巢癌等）的研究有着重要意义。在哺乳动物卵泡生长发育的过程中，卵母细胞由不断增加的颗粒细胞层包裹。卵巢组织中的膜细胞作为卵泡的外层细胞可以维持卵泡结构的完整性，参与构成卵母细胞和颗粒细胞发育的微环境且为类固醇激素的生成提供底物。在哺乳动物中调节膜细胞类固醇激素生成的机制已见相关报道，但是有关卵泡膜细胞的聚集、生长和分化的研究尚不深入。
方法简介：

公司实验室分离的小鼠卵泡膜采用先机械分离后胶原酶消化结合Percoll密度梯度离心法、并通过专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的小鼠卵泡膜经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%yi蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

准备工作

1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。

2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。

3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。

取材与处理

1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。

2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。

3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。

细胞分离

1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。

2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。

3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。

细胞观察与检测

1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。

一、取材与分离

1. 快速操作

- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。

- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。

2. 消化酶选择

- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。

- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。

二、培养条件优化

1. 培养基选择

- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。

- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。

2. 贴壁与传代

- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。

- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。

三、污染控制

1. 无菌操作

- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。

2. 支原体检测

- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。

四、状态监控

1. 日常观察

- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。

- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。

2. 传代与冻存

- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。

- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。