人肠平滑肌细胞 返回列表页

人肠平滑肌细胞 具体操作
取出冻存管： 根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
初学者易犯错误：水浴锅未预热或者未预热到37℃。
水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。
离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。
一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。
实验前准备：将水浴锅预热至37℃
人肠平滑肌细胞用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶 等。
迅速解冻：

迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
.约-2min后

冻存管内液体*溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
平衡离心：用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3min
制备细胞悬液：吸弃上清液。
向离心管内加入0ml培养液，吹打制成细胞悬液。
活化与细胞复苏    收到细胞株包裹时， 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存（置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2）。
 细胞复苏的原则－快速融化：必须将冻存在-96℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
细胞计数：细胞浓度以5×05/ml为宜。
培养细胞将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃和5％CO2的培养箱内2-4小时（或者24-48小时）后换液继续培养培养，换液的时间由细胞情况而定。
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