生物样本库的建设

生物样本库建设

定义

生物样本库biological specimen bank, BSB

标准化地收集、保存用于各种研究的正常或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、RNA、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其质量控制、信息管理与应用系统。

ISO标准

ISO15189:2003 医学实验室质量和能力的要求

CNAS-CL02 医学实验室-质量和能力的认可准则

ISO/IEC17025:2005 检测和校准实验室能力的通用要求

CNAS-CL01 检测和校准实验室认可准则

ISO9001:2008/GBT19001-2008 质量管理系统 要求

GB/T1.1-2009 标准化工作导则：标准的结构和编写规则

实验室安全

GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求 

CNAL/AC30-2005 实验室生物安全认可准则

WS/T233-2002 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则

GB 50346-2004 生物安全实验室建筑技术规范

已建立实验室生物安全管理体系

临床实验室

GB/T 20468-2006 临床实验室定量测定室内质量控制指南

GB/T 20469-2006 临床实验室设计总则

GB/T 20470-2006 临床实验室室间质量评价要求

WS/T102-1998 临床检验项目分类与代码

WS/T224-2002 真空及其添加剂

WS/T225-2002 临床化学检验血液标本的收集与处理

WS/T227-2002 临床检验操作规程编写要求

WS/T228-2002 定量临床检验方法的初步评价

WS/T230-2002 临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术应用

WS/T249-2005 临床实验室废物处理原则

WS/T250-2005 临床实验室质量保证的要求

WS/T251-2005 临床实验室安全准则

WS/T255-2005 临床检验医学参考测量实验室

伦理

赫尔辛基宣言

涉及人类为研究对象的生物医学研究了伦理方针指南

关于DNA序列申请zhuan li的声明：zhuan li

关于早期发布原始序列数据有关专li申请问题的声明

关于DNA取样的声明：控制与获取

世界人类基因组与人权宣言

涉及人体的生物医学研究伦理审查办法（试行）

人类基因治疗申报临床试验指导原则

关于利益共享的声明

关于基因治疗的声明

关于人类基因组数据库的声明

涉及人类的生物医学研究伦理准则

人类遗传数据宣言纲要

人体生物医学研究伦理指南

运输

物流术语

液氮生物容器

中国民用航kong危险品运输管理规定

危险物品航kong安全运输技术细则

标本采集

生物标本采集和储存

   研究成功的关键

要求

根据所采样本的类型和所分析的物质而定

在采集和储存过程中不能受到“污染”

储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果

所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识

标本采集

尿液标本的保存- hao不超过2h

尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如、尿胆原被氧化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。

尿液保存常用方法有两种：

1.冷藏法：4℃条件下不超过8h

可抑制微生物生长，维持尿液pH恒定，使尿中有形成份的形态基本不变，但是可导致磷酸盐和尿酸盐析出形成沉淀，影响尿沉渣检查。

标本采集

尿液标本的保存- hao不超过2h

  尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如、尿胆原被氧化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。

尿液保存常用方法有两种：

2.化学防腐法：

①甲苯：（一般用量为1.0～2.0ml甲苯/100ml尿液），防止细菌污染，通常用于尿酮体、尿糖，尿蛋白质等测定

②甲醛：每100ml尿液加40%甲醛0.5ml，可抑制细菌生长并固定尿中有形成份，适用于尿液中细胞与管型的测定；

③：用10%的异丙醇溶液，达到抑菌及保护代谢物的作用，适用于尿钾、钠、钙等测定

④浓盐酸：每100ml尿标本中加入浓盐酸1ml即可，使尿液维持在pH 2.0左右。主要可用于17-羟皮质类因醇、17-酮类固醇、儿茶酚胺、VMA等定量测定等。

标本采集

标本运送

血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室，注意是否存在干扰血凝块。

标本运送过程中要注意样本的包装、温度要求及处理方法等，要确保分析成分的稳定性，标本管在运送过程中要保持管口封闭，向上垂直放置，避免剧烈振动

尿液标本从流取到检验应在2小时内完成，如不能及时送检分析，必须加防腐剂或冷藏不超过8小时

细菌检查标本应采用消毒容器，防止细菌污染，室温条件不超过2小时或4℃冷藏保存。

标本运送

标本处理和保存

标本采集后应及时处理、分装后保存

血液标本处理操作规程

DNA提取和纯化操作规程：血液、粪便、棉拭子、唾液

RNA提取和纯化操作规程：血液、棉拭子

蛋白质提取和保存操作规程

标本处理和保存

血液标本处理操作规程

全血、血清、血浆、干血片、血凝块、白细胞

全血：由液态血浆和血细胞组成

血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含有纤维蛋白原。

血清：指全血不经抗凝处理，在凝固过程中，血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆

标本处理和保存

血液标本处理操作规程

全血标本的保存

生化检验：尽可能在2小时内检验或分离血清/血浆，不能及时分离或检验时，应4℃低温冷藏，不能超过24小时。操作时动作应轻柔，避免剧烈振荡，避免温度变化过大或冻融，易导致溶血。

DNA检测： 4℃保存不超过7天，-20℃保存不超过一年，-80℃保存

RNA检测：采集后应尽快分离血细胞、血清/血浆，或加入RNA抑制剂（如trizol）， -20℃保存不超过2个月，-80℃保存不超过半年。

标本处理和保存

血液标本处理操作规程

血清的分离

采血时应采用无抗凝剂的；

采血后，室温（22～25℃）放置30～60min，加促凝剂时凝集加快（5～15min)，1000～1200g离心10min，吸取上层淡黄色上清液。有凝胶屏障的分离管可保存在4℃ ，24小时内吸取上层血清；无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。

保存条件

常温下不超过8小时；4 ℃不超过48小时；48小时以上的应置于-20℃保存；提取RNA的应立即置于-80 ℃保存。避免反复冻融。

标本处理和保存

血液标本处理操作规程

血浆的分离

采血时应采用有抗凝剂的；

采血后，1000～1200g离心10min，吸取上层淡黄色上清液。有凝胶屏障的分离管可保存在4℃ ，24小时内吸取上层血清；无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。

保存条件

常温下不超过8小时；4 ℃不超过48小时；48小时以上的应置于-20℃保存；提取RNA的应立即置于-80 ℃保存。避免反复冻融。

质量控制

标本入库前应经过质量控制，符合质量标准的标本才能入库

①符合标本采集、处理的要求，检查采集和处理记录

②标本信息采集表填写完整

③标本运送符合要求，交接运送记录完整

④标本管无空管、无破损、良好密封，标签清晰完整、无脱落

⑤检查标本是否受到污染，核酸质量

标本入库

标本编号原则

总原则：唯yi性、共享性

辅原则：在满足总原则基础上，尽量精简，编号长度尽量保持统一

举例：

2017年收到的第102份标本，类型是粪便，目的用于结肠道菌群分析

  1700102D15W21

2017年收到的第256份标本，类型是血清，目的用于心梗的研究

  1700256G01BS1  

生物安全

执行《实验室生物安全管理体系》

健康监测：定期体检，必要时免疫接种。

个人防护：手套、口罩、、护目镜；脱下手套后、离开微生物室前应洗手，接触血液体液或其它污染物时，应立即洗手。操作尖锐物品如针头，应戴防ci破手套。

尽可能在生物安全柜内进行标本的操作。

标本库冰箱应采用专人专锁管理，禁止随意取用，防止失窃。

感染性废弃物交由专业环保公司处置。

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