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植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒使用说明

时间:2013/4/25阅读:402
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植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒仅供研究使用,用于测定植物组织,细胞及相关液体样本中过氧化物酶(POD)的活性。
 植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中过氧化物酶(POD)水平。用纯化的过氧化物酶(POD)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧化物酶(POD),再与HRP标记的过氧化物酶(POD)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化物酶(POD)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中过氧化物酶(POD)浓度。

植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒样本处理及要求:
1. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
3. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
4. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

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