DAPI染色原理:
DAPI 为一种荧光染料,可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光,和EB相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ,且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟,在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。
a、 正常的烟草细胞核:核形完整,染色质均匀。
b、染色质固缩,向外周聚集,形成周边化。
c、 染色质进一步固缩,形成很多颗粒物质。
d、 细胞核破裂形成碎片,核解体。
染色步骤
在细胞移植前,将DAPI 以一定的浓度加入培养基中,与细胞共同孵育过夜,用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI,在用酶消化后离心收集细胞,加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。
存储条件:-20℃避光保存
每次使用,用量较少,可反复冻融,无需分装
注意事项:
1、DAPI强烈致癌,操作时要戴上手套。
2、贮存液用70%酒精配制,浓度100 µg/ml,可用黑纸包住,长期冻存。使用液按1:1000用PBS稀释,zui终浓度100 ng/ml。
3、DAPI是非常的DNA染料,固定过和没有固定过的活细胞均可用。