Percoll分离液的配置与使用方法

Percoll分离液的配置与使用方法

Percoll分离液是一种经过聚乙烯吡咯烷酮处理过的硅胶颗粒，经过高速离心后可形成连续密度梯度，由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。Percoll分离液采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。此外，Percoll分离液不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。Percoll常用于分离和传话植物原生质体、核、叶绿体、和线粒体。

适合分离细胞，亚细胞成分和大病毒(>70S)，渗透压均匀，粘度低，可调至生理离子强度和pH，分离条件温和，对细胞无毒性，可以灭菌消毒。

Percoll分离液的配置与使用

1、不同浓度(密度)Percoll分离液的制备: 先用9份Percoll分离液与1份8.5％ NaCl混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl)稀释到所需浓度。

2、不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

3、装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4、离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5、取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

Percoll细胞分离液的优点

Percoll渗透性低、不穿透细胞、密度高、无毒害，是目前较理想的介质。Percoll密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离，纯化了包括人血液细胞、骨髓细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。

Percoll细胞分离液注意事项：

1、Percoll细胞分离液在储存及孵育过程中避免将实际保留在强光中。

2、试剂瓶盖需盖紧，防止蒸发和污染。

Percoll分离液的配置与使用方法