流式细胞术检测技术服务
1、检测项目：
（1）细胞周期细胞 （2）细胞凋亡 （3）免疫细胞分型 （4）表面抗原鉴定 （5）细胞内钙离子检测 （6）线粒体功能 （7）细胞分选
2、样本及来源：
1） 单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2） 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
说明：
1、 实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。
2、 送检样本量：
1）、单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2）、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、 用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。
4、 我公司在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
5、 用户须一次性全额预付实验费。
6、 部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供，；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委托我公司代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
7、 由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
8、 请在表中说明检测具体要求（可另附页），由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。
9、 请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。
客户提供：
（1）标本:组织、细胞、全血（抗凝）
（2）抗体（荧光素标记）
PEzui强，适用于弱表达抗原
FITC*，适用于强表达抗原，适用范围广
biotin-avidin不适合 弱抗原的检测
（3）其他试剂（如Fluo-3）
（4）染色试剂盒
附：流式细胞术检测样品*制备方法：
A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：
（1） 、收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
（2） 、用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。
（3） 、用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体（5×105个细胞/20ul抗体）的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待测即可。
（4） 、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：
（1）、收集2×106个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。
（2）、用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；
（3）、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。
（4）、加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。
（5）、加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。
（6）、加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。
（7）、流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：
（1）、待测样本制成单细胞悬液，然后2000转/分离心5分钟，弃上清。
（2）、用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。
（3）、调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
（4）、PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。
注：本方法仅供参考，如有其它要求，请在送样前说明。
| 服务项目 | 样品外理 | 应用的试剂 | 收费 |
| 细胞周期细胞 | 细胞——*消化——PBS洗——70%乙醇4℃固定过夜 （不超过一周） | RNA酶，PI 染料 | <10个样品，80元/个 >10个样品，60元/个 试剂费已包括。 |
| 细胞凋亡 | 新鲜培养的细胞 | Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 | <10个样品，150元/样品 >10个样品，120元/样品 已包括试剂费用，客户提供试剂可减20元另需细胞培养费用。 |
| 免疫细胞分型 | 培养的细胞：如白血病细胞，客户刺激好的细胞、抗凝全血、脾匀浆 | 破膜剂，固定剂，刺激剂、特异性抗体（需客户提供） | 双染： <10个样品，120元/样品 >10个样品，100元/样品 三染：在原来基础上加30元 需要分离细胞、培养、刺激的具体情况另记 |
| 表面抗原鉴定 | 培养的细胞 | 特异性抗体（需客户提供） | 单染： <10个样品，80元/样品 >10个样品，60元/样品 双染：在原来基础上加30元 三染：在原来基础上加30元 |
| 细胞内钙离子检测 | 培养的细胞 | Fluo-3 AM（钙离子荧光探针） | <10个样品，100元/样 >10个样品，80元/样品 （已包含试剂） |
| 线粒体功能 | 仅适用于悬浮或贴壁培养的新鲜细胞 | 客户提供试剂盒 | 检测费可同细胞周期 |
| 细胞分选 | 收费：标记费用+分选仪使用费用 价格体系类似于共聚焦 |
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