HiFi Taq DNA Polymerase说明书

货号                                                  规格

PE008-01                                         100ulx 1 （500 U）

PE008-05                                          100ul x 5 （2500U）

PE008-10                                          100ul x 10 （5000 U）

保存：-20℃

运输：2-8℃

【产品概述】

用普通PCR方法扩增较长的DNA片段时，由于DNA Polymerase自身的特性，如Taq酶扩增效率高但保真性差，Pfu酶保真性虽高但扩增效率低下，结果往往不理想。 本公司研制的HiFiTaq DNA Polymerase，系在Taq酶的基础上，按*比例混合了具有3’5’端DNA外切酶活性（即校读活性）的高保真DNA Polymerase，并且配备优化的PCR缓冲液，*地实现了扩增效率与保真性的兼容。HiFiTaq DNA Polymerase的保真性是Taq酶的3~4倍，适合扩增保真度要求较高，而Pfu DNA Polymerase无法有效扩增的10 kb以下的DNA片段，如基因诊断、较长DNA片段的克隆和点突变等应用。使用HiFiTaq DNA Polymerase扩增的一部分PCR产物的3’-末端附有突出的A碱基，可直接进行T载体克隆。

【适用范围】



以基因组DNA、cDNA、质粒等为模板的长片段且需要高保真的DNA片段的克隆、测序。



半定量PCR实验，微量DNA模板的检测以及RT-PCR。

【产品组分】

HiFiTaq DNA Polymerase （5 U/μl） 100 μl

10 x HiFiTaq PCR Buffer 1 ml

【保存条件】

-20℃恒温保存一年

【活性定义】

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位（U）。

【使用方法】

用户需自备的试剂：DNA模板、引物、dNTP Mix、ddH2O

操作示例：

1．PCR反应体系的建立：冰上配制下列反应 2. PCR反应循环的设置：

DNA模板 1 μl 94℃ 2 min

10 x HiFiTaq PCR buffer 5μl 94℃ 30 sec

25 mM MgCl2 不加或适量 55~65℃ 30 sec 25~35循环

10 mM dNTP Mix 1 μl 72℃ 1min/1 kb

正向引物 （10 μM） 1 μl 72℃ 5 min

反向引物 （10 μM） 1 μl

Taq DNA polymerase （5 U/μl ） 0.5~1 μl

ddH2O 补足至50 μl

 模板量：10~1000 ng基因组DNA，1~30 ng质粒，或1~2 μl RT-PCR反应后的cDNA

注意：以上举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定*反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系。

3. 结果检测：取2 μl反应液电泳观察结果。

【补充说明】

1.TA克隆：使用HiFiTaq DNA Polymerase扩增的一部分PCR产物附有3’-末端突出的A碱基，可以直接进行TA克隆。克隆1 kb以上的PCR产物时，可先使用Taq DNA Polymerase对PCR产物进行加A处理后，再与T载体连接，以提高克隆阳性率。

2.平端克隆：使用HiFiTaq DNA Polymerase扩增的PCR产物可直接克隆到含有5’-磷酸基团的平端克隆载体中。

3.HiFiTaq扩增10 kb以上的DNA片段的效率较低。如需大量扩增10 kb以上片段，同时对保真性能要求不很高时，建议使用我公司的LA-GC Taq DNA Polymerase （货号PE009-01） 或LA-GC Taq Master Mix （货号PM009-01）。

4.扩增复杂结构 （如GC含量高） 的DNA片段时，建议使用High-GC DNA Polymerase 或在反应液中加入适量PCR Enhancers （货号PS002或者PS003），以提高PCR反应的灵敏度和特异性。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，*于此产品的价值本身。