Super HiFi DNA Polymerase说明书

货号                                                   规格

PE012-T                                           10U（1U/μl，试用装）

PE012-01                                         100U（1U/μl）

PE012-02                                          200U（1U/μl）

PE012-05                                          500U（1U/μl）

保存：-20℃

运输：2-8℃

【产品概述】

Super HiFi DNA Polymerase是一种超保真DNA聚合酶，具有5’3’ DNA 　聚合酶活性和3’5’　的外切酶活性（即校读活性），能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象，在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的50倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。同时该酶还具有快速的DNA合成速度，约相当于普通Taq DNA Polymerase的4倍、Pfu DNA Polymerase的8倍。该酶合成能力很强，即使是复杂的模板，也能快速准确的完成反应，尤其适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增，如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等，也可用于DNA片段的末端补平。使用扩增得到的PCR产物无3’端突出碱基，不可直接用于TA克隆。

适用范围】



高保真扩增，长片段的快速扩增，如基因克隆、定点突变等。



高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增。

【产品组分】

（1 U/μl） 100 μl

5 x Super HiFi Buffer 1.25 ml

5 x Super HiFi High-GC Buffer 300 μl

25 mM MgSO4 300 μl

* DMSO 50 μl

10* Loading Buffer 1.25ml

【保存条件】

-20℃恒温保存一年

【活性定义】

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位（U）。

【注意事项】

1. 在50μl 的反应体系中使用量为0.5~1.0 U，不要超过2 U。

2. Super HiFi DNA Polymerase扩增时延伸速度约为15~30 sec/1 kb，不要超过1 min/1 kb。应根据扩增产物的长度和模板的复杂性设置相应的延伸时间，复杂性较低时（例如：质粒、λDNA）可用15 sec/1 kb的延伸时间；复杂性较高的基因组DNA模板，延伸时间则应为30 sec/1 kb；对于有些cDNA模板，延伸时间可以增加到40 sec/1 kb。

3. Super HiFi DNA Polymerase的3’5’　的外切酶活性可降解引物，用酶量过多会导致引物部分或*降解，电泳检测时产生弥散带型或无扩增产物。故在反应体系中应先加dNTP，再加酶，并立即进行PCR反应。

4. 用扩增时，当引物长度大于20个碱基，复性温度为Tm＋3℃；当引物小于20个碱基，复性温度为zui低的Tm值。建议使用引物终浓度为0.5 μM，如果需要可在0.2~1.0 μM之间，比Taq酶高。

5. Super HiFi DNA Polymerase具有*的热稳定性，变性温度可以高于98℃。我们*大多数模板的初始变性温度是98℃，变性时间为30 sec。

6. 在扩增反应时应使用高质量的dNTP（Cat. No. PS001-02），不*使用dUTP和其它可诱导产生dUTP或类似物的试剂，通常使用终浓度各为0.2 mM 的dNTP就可以达到比较好的效果。

7. Super HiFi DNA Polymerase的PCR产物经过纯化后，可直接与经去磷酸化的平末端目标载体连接，也可先连接到线性平末端克隆载体上，再经亚克隆转移至目标载体。如果需要与线性T载体连接，应先纯化去除后，再对PCR产物的3’端添加A碱基，加A反应可使用taq或A-Tailing Kit。

【使用方法】

用户需自备的试剂：DNA模板、引物、dNTP Mix、ddH2O

操作示例：

1．PCR反应体系的建立：冰上配制下列反应 2. PCR反应循环的设置：

DNA模板 Xμl 94℃ 2 min

5 x Super HiFi buffer（10mM MgSO4）** 10μl 94℃ 30 sec

25 mM MgSO4 不加或适量 55~65℃ 30 sec 25~35循环

10 mM dNTP Mix 1 μl 72℃ 30 sec/1 kb

正向引物 （10 μM） 1 μl 72℃ 5 min

反向引物 （10 μM） 1 μl

ddH2O 补足至49.5 μl

Super HiFi DNA polymerase （1U/μl ） 0.5μl

*模板量：10~1000 ng基因组DNA，1~30 ng质粒，或1~2 μl RT-PCR反应后的cDNA

**可以用MgSO4进行优化PCR实验。

注意：以上举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定*反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系。

3. 结果检测：取2 μl反应液电泳观察结果。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，*于此产品的价值本身。