猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 使用说明书
【产品名称】
通用名:猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Classical Swine fever virus (ELISA)
【包装规格】 96T×2/盒
【预期用途】
本试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒IgG抗体,评估猪场猪瘟疫苗免疫状况。
【原 理】
本试剂盒系由预包被猪瘟病毒E2重组蛋白的微孔板和酶标记二抗及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清或血浆中猪瘟病毒特异性抗体。实验时,在包被板中加入对照血清和稀释的待检血清,经温育后,若样品中含有猪瘟病毒的特异性抗体,则将与包被板上抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有特异性抗体。
【储存及有效期】
于2~8℃避光保存,有效期为12个月。
包被板开封后请于2~8℃避光保存,使用期限为1个月。
【试剂盒组成】
1. | 猪瘟病毒抗原预包被微孔板条 | 96T×2 |
2. | 酶标记物 (红盖) | 11ml×2 |
3. | 样品稀释液 (黄盖) | 50ml×1 |
4. | 20X浓缩洗涤液 (透明盖) | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白盖) | 11ml×1 |
6. | 底物液B (黑盖) | 11ml×1 |
7. | 终止液 (黄盖) | 11ml×1 |
8. | 阳性对照 (红盖,已灭活) | 1 ml×1 |
9. | 阴性对照 (绿盖,已灭活) | 1 ml×1 |
10. | 盖板膜 | 1张 |
11. | 自封袋 | 1个 |
12. | 说明书 | 1份 |
【样品制备】 取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品短期可于2~8℃保存,*需置-20℃保存。
【样品稀释】 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释(如5μl血清加入195μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。
【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温(25℃左右),并摇动使沉淀的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【试验操作方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量微孔板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴性/阳性对照孔分别加入阴性/阳性对照血清100μl;样品孔每孔加入稀释后的血清样品100μl。
4.混匀,置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。
【结果判定】
定义:N=阴性对照孔平均A值;P=阳性对照孔平均A值;S=样品孔A值;S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值。
1.正常情况下,N≤0.10,P≥0.50。
2.S/P≥0.18时判为阳性,S/P<0.15时判为阴性,0.15≤S/P<0.18时判为可疑。
当本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足,建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪瘟病毒IgG抗体。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以*溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
【】
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