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猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒

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更新时间:2016-08-15 19:44:00浏览次数:450次

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猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒

  猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 使用说明书
产品名称】

通用名:猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Classical Swine fever virus (ELISA)

【包装规格】 96T×2/盒

【预期用途】 

本试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒IgG抗体,评估猪场猪瘟疫苗免疫状况。

【原    理】

本试剂盒系由预包被猪瘟病毒E2重组蛋白的微孔板和酶标记抗及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清或血浆中猪瘟病毒特异性抗体。实验时,在包被板中加入对照血清和稀释的待检血清,经温育后,若样品中含有猪瘟病毒的特异性抗体,则将与包被板上抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有特异性抗体。

【储存及有效期】

于2~8℃避光保存,有效期为12个月。

包被板开封后请于2~8℃避光保存,使用期限为1个月。

【试剂盒组成】 

1.

猪瘟病毒抗原预包被微孔板条

96T×2

2.

酶标记物  红盖

11ml×2

3.

样品稀释液  黄盖

50ml×1

4.

20X浓缩洗涤液  透明盖

40ml×1

5.

底物液A  (白盖

11ml×1

6.

底物液B  (黑盖) 

11ml×1

7.

终止液  黄盖) 

11ml×1

8.

阳性对照 红盖,已灭活

1 ml×1

9.

阴性对照 (绿盖,已灭活

1 ml×1

10.

盖板膜

1

11.

自封袋

1

12.

说明书

1


【样品制备】  取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染样品短期可于2~8℃保存,*需置-20℃保存。

【样品稀释】  样品稀释液待检血清按40倍稀释(5μl血清加195μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。

 

【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温(25℃左右),并摇动使沉淀的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【试验操作方法】

 1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。

2.取所需用量微孔板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴性/阳性对照孔分别加入阴性/阳性对照血清100μl;样品孔每孔加入稀释后的血清样品100μl。

4.混匀,置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。

6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

7.洗涤,同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A450)。

【结果判定】

    定义:N=阴性对照孔平均A值;P=阳性对照孔平均A值S=样品孔A值S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值。

1.正常情况下,N≤0.10,P≥0.50。

2.S/P≥0.18时判为阳性,S/P<0.15时判为阴性,0.15≤S/P<0.18时判为可疑。

当本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足,建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

    该试验仅作为定性检测猪瘟病毒IgG抗体。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以*溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

【】

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