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质粒名称：pHyVec4
质粒规格：2ug

实验步骤:
1)质粒提取
1.10,0001min离心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中
2.加入100溶液1,振荡至*悬浮
3.加入200溶液2,立即轻柔颠側离心管6次,使菌体充分裂解,随后将离心管冰上放置
3分钟
4.加入150山溶液3,立即温和颠倒离心管数次,冰上放置3分钟,10,00g离心10mins
5.将步骤4的上清转移至新的离心管(尽量去除杂质),加入等体积的/氖仿/异成醇混
合均匀10,000离心5min
将步骤5的上清转移至新的离心管,加入2倍体积的无水乙醇,室温放置5-1omin,沉
降DNA
7.10000g离心10分钟,弃乙醇,保留沉淀,加入1ml706的乙醇洗涤沉淀,10,000离
心5分钟
8.倒掉乙醇溶液,用吸水纸吸净管壁上的水珠,室温蒸发痕量乙醇
9.加入适量含 Rnase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA
2)质粒鉴定琼脂糖礙胶电泳
灌胶:胶中加入芡光染料< SYBR Green)
加样:质粒+上样緩冲液→混匀
电泳
结果观察:UV灯下

pHyVec4实验分析：
裂解细胞中除含有质粒DNA外,还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质,因
用碱裂解法除去杂质
1、防止DNA裂解: Solution1
1)、所含糖增加溶洨黏度,維持渗透压,防止DNA受机械剪切作用降解
2)、所含EDTA抑制酶活性
2、溶解与变性: Solution2
1)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性

100396-200301 枸橼酸 含量测定 200mg

100398-200701 丹蒽醌 含量测定 100mg

100399-200601 氢溴樟柳碱 含量测定 100mg

100401-200501 含量测定 100mg

100407-200301 含量测定 50mg

100408-200401 氯美扎酮 UV法溶出度检查 100mg

100410-200301 UV法含量测定 100mg

100411-200501 含量测定 100mg

100412-200401 HPLC法含量测定 100mg

100413-200601 胺 鉴别 100mg

100414-200501 含量测定 100mg

100415-200301 含量测定 50mg

100416-201004 含量测定 100mg

100417-200501 二羟丙 含量测定 100mg