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上海莼试生物技术有限公司
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番茄内标准LAT52基因PCR试剂盒常见问题与解决方法
2022-7-5 阅读(59)
番茄内标准LAT52基因PCR试剂盒常见问题与解决方法:
阳性对照、待测样本均无条带。
1)、PCR反应体系或反应条件不合适。
2）、PCR试剂保存不当失去活性。
3）、引物设计问题。
解决方法：
1）使用梯度PCR摸索PCR反应条件。
2）2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
3）尝试重新设计引物进行检查。
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。
1、不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。
2、加入组织裂解液过量。
3、样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。
4、模板加入量不适合。
5、PCR循环数不足。
解决方法：
1、使用新鲜的试剂。
2、增大反应体系，或减少裂解液的用量。
3、裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
4、在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
5、适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。
