实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
参数规格：
产品名称：小肠结肠炎耶尔森氏菌（PCR-荧光探针法）
产品货号：CP100318
产品规格：48T  0.1PCR管/48T   0.2PCR管
产品分类：小肠结肠炎耶尔森氏菌PCR-荧光探针法
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
肠沙门氏菌肠亚种波那雷恩血清型G蛋白偶联受体GPR37样蛋白1抗体Human XRCC2 ELISA Kit鸡α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)免疫试剂盒

大肠埃希氏杆菌G蛋白偶联受体GPR105蛋白抗体Human YOD1 ELISA Kit鸡α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)免疫试剂盒

荧光假单胞菌G蛋白偶联受体GPR12蛋白抗体Human PDE1C(Calcium/calmodulin-dependent 3′,5′-cyclic nucleotide phosphodiesterase 1C) ELISA Kit鸡α干扰素(IFN-α)免疫试剂盒

稻平脐蠕孢G蛋白偶联受体GPR110蛋白抗体Human XRCC5/Ku80(X-ray repair cross-complementing protein 5) ELISA Kit鸡α1酸性糖蛋白(OGCHI)免疫试剂盒

北京掷孢酵母G蛋白偶联受体GPR125蛋白抗体Human XRCC4 ELISA Kit鸡α/β水解酶域包含蛋白5(ABHD5)免疫试剂盒

杏鲍菇G蛋白偶联受体RTA蛋白抗体Human WIPI1 ELISA Kit鸡Toll样受体4(TLR4)免疫试剂盒

根瘤菌G蛋白偶联受体GPR155蛋白抗体Human XAB2 ELISA Kit鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)免疫试剂盒

柔嫩艾美耳球虫G蛋白偶联受体GPR30蛋白抗体Human MTX2(Metaxin-2) ELISA Kit鸡L苯氨酸解氨酶(PAL)免疫试剂盒

Chitinophaga sp.G蛋白偶联受体GPR86蛋白抗体Human WIPI2 ELISA Kit鸡HSP90抗体(IgM)免疫试剂盒

停滞棒杆菌G蛋白偶联受体HM74蛋白抗体Human WIT1 ELISA Kit鸡HSP90抗体(IgG)免疫试剂盒

小单孢菌样蛋白1样蛋白抗体Human WNK4 ELISA Kit鸡HSP72抗体(IgM)免疫试剂盒

细链格孢菌磷酸化接头蛋白Gab 2抗体Human WNT3(Proto-oncogene Wnt-3) ELISA Kit鸡HSP72抗体(IgG)免疫试剂盒

酿酒酵母磷酸化接头蛋白Gab2抗体Human WRAP53 ELISA Kit鸡HSP60抗体(IgM)免疫试剂盒

娄彻链霉菌干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因抗体Human WDR81 ELISA Kit鸡HSP60抗体(IgG)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌磷酸化接头蛋白Gab 2抗体Human WRN ELISA Kit鸡HSP27抗体(IgG)ELISA ki

甘薯长喙壳多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶13抗体Human WRNIP1 ELISA Kit鸡HSP27 IgM 抗体免疫试剂盒
小肠结肠炎耶尔森氏菌（PCR-荧光探针法）: 炭黑曲霉 质量规格：分析标准品,99.2%槲皮素-7-O-葡萄糖苷

链霉菌属菌Streptomyces│sp. 质量规格：10μg/ml,u=6%脱水内酯