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人胚肺成纤维细胞;MRC-5
人胚肺成纤维细胞;MRC-5
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更新时间:2017-06-06 10:19:18浏览次数:314

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【简单介绍】
人胚肺成纤维细胞;MRC-5
,采用干冰保存运输收到细胞时,若干冰已经*融化,请立即将细胞复苏培养;若尚留有干冰,请立即将细胞放入液氮中保存待用,请按条件贮存细胞,切不可将细胞置于高温环境。

公司是*的ATCC细胞供应商,提供人胚肺成纤维细胞;MRC-5的报价,咨询,称技术服务,咨询选购
细胞名称  人胚肺成纤维细胞;MRC-5  
形态特性   成纤维细胞样   
生长特性  贴壁生长   
特征特性   该细胞系来自14周龄男性胎儿的正常肺组织。由 Jacobs JP于1966年建立。    
培养条件   M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)   10%FBS  
传代方法   1:2传代;3-4天一次  
传代情况  PN15  
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS   
支原体检测  荧光法(-)   
STR   Amelogenin:XY;D8S1179:13;D21S11:31.2;D7S820:10,11;CSF1PO:11,12;D3S1358:15,17;TH01:8;D13S317:11, 14;D16S539:9, 11;D2S1338:20;D19S433:14,15;vWA:15;THOX:8;D18S51:15,21;D5S818:11, 12;FGA:21,23。  
同工酶    
染色体    
使用权限  A类培养需要满足以下条件
1、无菌、无毒的环境:首先应保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境,即对培养液和所有的培养用具进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素以防培养过程中的污染。

2、营养物质:细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。

3、温度和pH:细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近。多数细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。

4、气体环境:培养所需气体主要有O2和CO2,O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。

操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
外基质,参与系膜基质及肾小球基底膜的修复与更新,在肾小球生理功能和病理反应中起着重要作用。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常肾组织。  
2)细胞鉴定:结蛋白(Desmin)免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。  
肾小球内皮细胞  
细胞详述  
肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛。在肾小球内,微血管受到高压,而加速了超滤作用的进行。肾小球过滤膜从内到外有三层:内层、中层和外层。其中,内层为内皮细胞层,附着在肾小球基底膜内。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常肾组织。  
2)细胞鉴定:Ⅷ子相关抗原(Factor Ⅷ)免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式:圆形,多角形细胞,贴壁培养。  
肾小球足细胞  
细胞详述  
肾小球为血液过滤器,肾小球毛细血管壁构成过滤膜。肾小球过滤膜从内到外有三层结构:内层为内皮、中层为肾小球基膜、外层为上皮细胞层,上皮细胞又称足细胞,其不规则突起称足突,其间有许多狭小间隙,血液滤膜过滤后,滤液入肾小球囊。在正常情况下,血液中绝大部分蛋白质不能滤过而保留于血液中,仅小分子物质如尿素、葡萄糖、电解质及某些小分子蛋白能滤过。  
肾足细胞即肾小球上皮细胞,它附着于肾小球基底膜的外侧,连同肾小球基底膜和肾小球基膜一起构成了肾小球血液滤过屏障。又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞,体外培养的原代细胞不能增殖。  
足细胞呈星型多突状,胞体较大,由胞体伸出许多突起,呈指状交叉覆盖于肾小球基底膜外表面,并通过黏附分子和蛋白多糖分子与肾小球基底膜相连。足细胞在正常情况下可以分泌肾小球基底膜的主要组成成分I型胶原和纤维连接蛋白,在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解肾小球基底膜作用的基质金属蛋白酶和组织蛋白酶,从而在肾小球基底膜的代谢平衡中发挥重要作用。  
细胞特性  
1)细胞来源于实验动物正常肾脏组织。  
2)细胞鉴定:广谱角蛋白(PCK)或WT-1(Wilm'sTumorProtein)免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式:不规则,含足突细胞,贴壁培养。  
输尿管上皮细胞  
细胞详述  
输尿管位于腹膜后,为一肌肉粘膜所组成管状结构,上起自肾盂,下终止于膀胱三角。输尿管管壁分为4层:黏膜表面、固有层、输尿管肌层和外膜。其中,黏膜表面为移行上皮。尿路上皮的研究是泌尿外科领域研究的热门,其中有尿路上皮肿瘤研究、输尿管损伤研究等。此,体外培养输尿管上皮细胞是输尿管生物学研究的基础和前提。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常输尿管组织。  
2)细胞鉴定:广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式:铺路石状细胞,不规则细胞,贴壁培养。  
输尿管平滑肌细胞  
细胞详述  
输尿管位于腹膜后,为一肌肉粘膜所组成管状结构,上起自肾盂,下终止于膀胱三角。输尿管管壁分为4层:黏膜表面、固有层、输尿管肌层和外膜。其中,肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常输尿管组织。  
2)细胞鉴定:平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。  
膀胱上皮细胞  
细胞详述  
膀胱壁由三层组织组成,由内外为粘膜层、肌层和外膜。其中,粘膜层为极薄的一层移行上皮组织,和输尿管及尿道黏膜彼此连贯。体外培养膀胱上皮细胞不仅为组织工程膀胱,尿道提供种植细胞的必要手段,也是研究移行上皮细胞肿瘤发生和治疗的基础与前提。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常膀胱组织。  
2)细胞鉴定:广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式:铺路石状细胞,不规则细胞,贴壁培养。  
 



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