人心型脂肪酸结合蛋白酶联免疫试剂【工作原理】
心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid binding protein,H-FABP)是心肌细胞中富含的一种小分子（15KDa）细胞质蛋白质,参与脂质体内平衡。H-FABP含量在骨骼肌中比心肌中低10倍，在肾脏、肝脏和小肠中含量更低。心肌损伤后，H-FABP释放至细胞外，出现于血流中，血浆H-FABP大量升高与梗塞面积间也有良好的相关性。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经*（biotin）标记。样品和*标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
人心型脂肪酸结合蛋白酶联免疫试剂【注意事项】
1． 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
2． 配制各种试剂时，切记混匀！
3． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
4． 建议所有标准品、样本都做双份检测。
5． 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
6． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
B．*标记抗体工作液：在使用前2小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul*标记抗体加抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
D. TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比列配制TMB显色工作液
【操作程序】
1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5． 将准备好的*抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔0.09ml依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应zui长不要超过30分钟）。
10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
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