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西安海研生物科技有限公司
酶底物法检测系统适用于地表水,地下水,生活污水和工业废水中总大肠菌群,粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定.本方法的检出限为10MPN/L.
水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法
根据样品污染程度确定接种量(见表1),避免接种样品培养后97孔定量盘(6.6)出现全部阳性或全部阴性。接种量小于100ml时,应稀释样品后接种,接种量为10ml时,取10ml样品加入到盛有90ml无菌水(6.8)的三角瓶(7.7)中混匀制成1:10的稀释样品,其他接种量的稀释样品依次类推。对于未知样品,可选用多个接种量进行检测。
9.2接种
量取100ml样品或稀释样品于灭菌后的三角瓶,加入2.7g±0.5g培养基(6.1)粉末,充分混匀,溶解后,全部倒入97孔定量盘(6.6)内,以手抚平97孔定量盘背面,赶除孔内气泡,然后用程控定量封口机(7.4封口。观察97孔定量盘颜色,若出现类似或深于标准阳性比色盘(6.7)的颜色,则需排查样品、培养基、无菌水等一系列因素后,终止试验或重新操作
注:9.1、9.2步骤在野外操作时应避开明显局部污染源,建议使用一次性手套、口罩、酒精灯等。
9.3培养
测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌时,将封口后的97孔定量盘放入恒温培养箱(7.3)中37℃±1℃下培养24h。测定粪大肠菌群时,将封口后的97孔定量盘放入的恒温培养箱中44.5℃±0.5℃下培养24h。
9.4对照试验
9.4.1空白对照
每次试验都要用无菌水(6.8)按照步骤9.1~9.3进行实验室空白测定。培养后的97孔定量盘不得有任何颜色反应,否则,该次样品测定结果无效,应查明原因后重新测定。
9.4.2阴性和阳性对照
总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪大肠菌群的阴性、阳性菌株参考表2。
检测指标 | 阳性菌种 | 阴性菌种 |
总大肠菌群 | 大肠埃希氏菌、 产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes) | (Staphylococcus aureus)、 假单胞菌属(Pseudomonas sp.) |
大肠埃希氏 菌 | 大肠埃希氏菌 | 、 假单胞菌属 |
粪大肠菌群 | 大肠埃希氏菌(耐热型)、 克雷伯氏菌属(Klebsiella trevisan) (耐热型) | 产气肠杆菌、 粪链球菌(Streptococcus faecalis)、 假单胞菌属 |
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