NBD C6-Ceramide for Golgi Staining

产品信息

产品简介

NBD C6-Ceramide是一种荧光鞘脂类似物，常用来研究鞘脂运输和代谢机制。也常用作活细胞和固定细胞内高尔基体的选择性染色剂。环境敏感性的NBD染料在水溶性环境下呈弱荧光，但在非质子溶剂和其它非极性环境内荧光增加，zui大激发和发射波长约为466/536nm。

产品性质

分子式（Formula）：C30H49N5O6

CAS NO.：94885-02-6

分子量（Molecular Weight）：575.74

外观（Appearance）：液体

Ex/Em：466/536nm (in MeOH)

溶解性：溶于DMSO、DMF.lv

步骤说明

1.NBD C6-Ceramide工作液的配制：

将低温保存的产品从冰箱取出后置于室温至少20min，低速离心后，往1mg冻干粉内加入347µl高质量无水DMSO，使其充分溶解，即配制得到5mM的储存液。根据单次用量分装置于-20℃冻存，避免反复冻融。

吸取一定量NBD C6-Ceramide（5mM）储存液按照1：1000的比例用HBSS/HEPES来稀释，混匀后即为NBD C6-Ceramide工作液（5µM），工作液请现配现用。

【注意】：NBD C6-Ceramide的工作浓度请结合实验目的以及实验对象进行适当调整。。

2.活细胞高尔基体的荧光标记

去除细胞培养液，用适量的溶液如HBSS/HEPES或其他缓冲液来洗涤生长在盖玻片上的细胞。

去除洗涤液，加入新鲜配制的NBD C6-Ceramide工作液（5µM），4℃孵育30min。

吸走染色液，用冰浴预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液37℃再孵育30min。

用新鲜培养液再洗涤一次，随后用荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到高尔基体呈明亮的强荧光染色，而细胞内的其他膜系统呈比较微弱的荧光染色。

3．固定细胞高尔基体的荧光标记

文献报道NBD C6-Ceramide适用于固定细胞染色，而BODIPY FL C5-ceramide和BODIPY TR-ceramide不适合。染色条件总的来说没那么严格。然而，避免使用去污剂和甲醇/丙酮固定剂。

注意事项

1）不能储存在无霜冰箱，建议按照单次用量分装于-20℃冻存。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃避光干燥保存，避免反复冻融，有效期6个月。

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