狂犬N蛋白(NP)包被抗体该病毒具有较强的神经组织嗜性,是致死性传染病-狂犬病的病原体。狂犬病病死率很高,目前尚无有效治疗药物。我国是狂犬病严重流行国家之一,近年来,我国狂犬病呈快速上升趋势,形成了自1950年以来的第三次大流行。因此建立狂犬病毒安全、快速并特异的实验室检测方法以提高狂犬病的实验室监测能力对狂犬病的防控非常必要。 狂犬病毒含5个结构蛋白,其中N蛋白是狂犬病毒的主要组成部分,其一级结构高度保守,存在着较高的狂犬病毒属的抗原交叉性,常作为狂犬病毒筛查和诊断应用的检测用抗原。pFastbac-to-bac杆状病毒表达系统通过外源基因特异性位点的转座作用可对外源基因进行高效的表达。该系统除了具有传统杆状病毒表达系统产量高、易纯化、安全性高、对翻译后蛋白进行加工修饰等优点,还能利用表达载体N端多聚组胺酸标签对目的蛋白进行纯化。因此本研究选择pFastBac-to-Bac杆状病毒表达系统对狂犬病病毒标准攻击强毒株(CVS-11)N基因进行表达,为检测试剂的研发和进一步建立实验室检测方法奠定基础。本实验应用RT-PCR方法扩增获得CVS-11 N基因片段,克隆入杆状病毒供体质粒pFastBac中,构建克隆有CVS-11 N基因的重组质粒pFastBac-N;将pFastBac-N转化DH10Bac E.coli感受态细胞,获得CVS-11 N基因杆状病毒重组表达质粒Bacmid-N;脂质体介导Bacmid-N转染Sf9昆虫细胞,60h后Sf9细胞出现了明显病变,提取转染后细胞DNA,PCR鉴定结果表明成功获得了表达CVS-11株N基因的P1代重组杆状病毒(AcMNPV-N)。 AcMNPV-N连续接种两代细胞扩增病毒,获P3代AcMNPV-N感染Sf9单层细胞,40h后收获细胞进行DFA、SDS-PAGE和Western-blot鉴定。
狂犬N蛋白(NP)包被抗体
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