货号 | 名称 | 规格 |
SH0117 | jisuanjimei （Creatine Kinase, CK）测定试剂盒(分光光度法50T/48S) | 50管/48样 |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应，在能量运转、肌肉收缩和ATP再生中有重要作用，是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。
测定原理：
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加。
组成：
产品名称 | SH0117-50T/48S | Storage |
提取液： | 60ml | 4℃ |
试剂一：粉剂 | 1瓶 | 4℃避光 |
试剂二：液体 | 15ml | 4℃ |
说明书 | 一份 | |
试剂一：粉剂1瓶，4℃避光保存，使用前加15ml蒸馏水溶解。
工作液：临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1混合。使用前37℃温育2min。
自备仪器和用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 ml石英比色皿和蒸馏水。
粗酶液提取：
1. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2. 血清样本：直接测定。
测定步骤：
1. 紫外分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2．在1 ml石英比色皿中加入200μl样本和300μl蒸馏水，最后加入500μl工作液，立即混匀，37℃下测定初始吸光值A1与1min后的吸光值A2，ΔA＝A2-A1。
CK活性计算公式
1、按组织蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性（nmol/min / mg prot）=
×V反总÷(V样×Cpr)= 804×△A÷Cpr
2、按组织样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.0时，每克样品1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性（nmol/min /g 鲜重）=×V反总÷(V样÷V样总×W)= 804×△A÷W
3. 按血清计算：
酶活定义：37℃，pH7.0时，每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性（nmol/min /L）=×V反总÷V样= 804×△A
：NADPH摩尔消光系数，6220 L /mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1ml；V样：反应体系中样本体积，0.2ml；T，反应时间，1min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g
注意事项
1. 配制好的工作液4℃稳定7天，请配制后尽快使用。
2. 血清的CK不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定24h。
3. 样品蛋白质含量需要另外测定，可选用BCA蛋白含量测定试剂盒进行测定。
4. OD值大于0.5可用提取液适当稀释样品，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。
