货号 | 名称 | 规格 |
SH0123 | guansuan合成酶（GOGAT）检测试剂盒（分光光度50T/48S） | 50管/48样 |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GOGAT分布于植物中，和guanxianan合成酶共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。
测定原理：
GOGAT催化guanxianan的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的guansuan；同时NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
组成：
产品名称 | SH0123-50T/48S | Storage |
提取液：液体 | 60ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 60ml | 4℃ |
试剂二：粉剂 | 2瓶 | 4℃ |
说明书 | 一份 | |
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）工作液的配制：在试剂二中加入25ml试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用（配好后3h内用完）；
（2）取0.1ml样本和0.9ml工作液于1ml比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
GOGAT活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol /min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V×样Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol /min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol /min /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.642×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
