ELISA法小鼠脑组织提取详细步骤

1,自行割取小鼠脑组织

2,4℃预冷的PBS漂去组织血渍，滤纸吸干残留的PBS；

3,称重，加入裂解液匀浆（在冰上）；

4,将得到的匀浆液用液氮反复冻融3次；

5,室温静置30mins，4℃15000r/min离心1h，取上清，分装，-80℃保存。

简介：目的建立动物组织内P53蛋白的免疫检测分析方法,为P53生物药物的代谢分布研究提供检测手段。方法辣根过氧化物酶（HRP）标记抗P53蛋白单克隆抗体3P40,应用标记后的抗体及重组P53蛋白的检测,建立竞争性ELISA检测方法;应用此方法建立血清样品中P53蛋白标准曲线,测定腹腔注射P53后不同时间小鼠血清中P53浓度。结果利用亲和层析纯化的3P40,进行HRP标记,ELISA检测3P40HRP滴度可达1∶200 000;建立的竞争性ELISA方法可以检测PBST中P53蛋白,灵敏度达30 ng/ml,日内精密度较高,相对标准偏差（RSD）小于5%,体现较好的重复性;分别应用正常小鼠血清、PBST稀释的重组P53蛋白样品进行竞争性ELISA检测,结果显示小鼠血清成分对P53蛋白检测有一定的影响;应用血清制备P53蛋白的标准曲线,检测了腹腔注射P53蛋白后不同时间点小鼠血清样品中的P53蛋白浓度。结论进行了抗P53单克隆抗体3P40的HRP标记,建立了竞争性ELISA方法,可用于P53蛋白药物血药浓度检测。

样本暂时不测应在-80°冷冻保存，一般可以放置6个月左右，-20°可保存3个月,尽量避免反复冻融。     本文由卡迈舒（Kmaels）生物科技王磊整理编辑~更多详情登陆我司主页浏览~~