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超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书
2022-6-9 阅读(923)
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书
规格：100T/48S
溶液的配制： 1、 试剂二：使用前先离心再吹打混匀。根据样本量将试剂二用蒸馏水稀释 10 倍后使用，当天用完。 2、 试剂四：根据样本量将试剂四用蒸馏水稀释 5 倍后使用，当天用完。
产品说明： SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生 成 H2O2和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。 通过及氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在 560nm 处有吸收；SOD 可清除 O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。 注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、细胞超声破碎仪、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤： 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 细胞、细菌样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液， 超声波破碎（功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。8000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。 2. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提 取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 3. 血清（浆）样本：直接检测。
三、SOD 活性计算 1、抑制百分率的计算 抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白×100% 尽量使样本的抑制百分率在 30-70%范围内，越靠近 50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于 30%或大 于 70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出 来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本或者提高操作表中样本体积，同时减少相同的蒸馏水 体积。 2、SOD 酶活性单位：在上述氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系中的 SOD 酶活力定义 为一个酶活力单位。 3、SOD 酶活性计算： （1）血清（浆）SOD 活性（U/mL）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷V 样×F =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×F （2）组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算： a.按样本蛋白浓度计算 SOD 活性（U/mg prot）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷(V 样×Cpr)×F =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F b.按样本质量计算 SOD 活性（U/g 质量）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷(W×V 样÷V 样总)×F =10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F c.按细菌或细胞数量计算 SOD 活力（U/104 cell）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷(500×V 样÷V 样总)×F =0.02×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：加入反应体系中的样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积 1mL； Cpr：蛋白样本浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；F：样本稀释倍数。
