主要用途

纯化核糖体（ribosome）蛋白质萃取试剂是一种旨在通过化学和有机溶剂处理，去除RNA成分，获得完整而纯化的核糖体蛋白系统的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种纯化核糖体（动物、人体、植物、细菌等）的蛋白质预制备。可直接用于特定蛋白后续纯化、蛋白一维或二维电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等等。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

核糖体（ribosome）是一种细小颗粒的核糖蛋白复合物（ribonucleoprotein complex），生命细胞制造蛋白质的非膜性结构元素和转译装置（translational apparatus），由RNA和蛋白质组成，具有多肽转移酶的活性。其分成2个亚体：大亚体和小亚体。核糖体通过大亚体结合转运核糖体（tRNA），而小亚体结合信使RNA（mRNA），然后阅读RNA提供的信息，转译（translation）成氨基酸，连接成蛋白分子。真核生物的核糖体位于胞质（游离核糖体）、线粒体和叶绿体中。其中胞浆核糖体为80S核糖体，由40S小亚体和60S大亚体组成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亚基和49个蛋白组成；而40S由18S RNA和33个蛋白组成。线粒体和叶绿体核糖体与原核生物相似，为70S核糖体，由30S小亚体和50S大亚体组成：50S包括5S、23S RNA和34个蛋白；30S包括16S RNA和21个蛋白。

产品内容

缓冲液（Reagent A）                毫升

清理液（Reagent B）            毫升

沉淀液（Reagent C）            毫升

萃取液（Reagent D）            毫升

产品说明书                  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；试剂具有腐蚀性和挥发性，注意操作安全和密闭瓶盖；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

（微型）台式离心机：用于样品操作

涡旋震荡仪：用于混匀

实验步骤

1． 从－70℃冰箱里取出核糖体颗粒样品，放进冰槽里

2． （选择步骤）如果核糖体样品不是颗粒状态，使用适量的缓冲液（Reagent A），调整到1毫升体系

3． （选择步骤）加入xx微升清理液（Reagent B），混匀

4． （选择步骤）放进4℃（微型）台式离心机离心10分钟，速度为10000g

5． （选择步骤）小心抽去上清液

6． 加入xx微升缓冲液（Reagent A）到核糖体颗粒样品中，混匀颗粒群

7． 加入xx微升沉淀液（Reagent C），混匀

8． 放进冰槽中孵育60分钟，期间每隔15分钟涡旋震荡60秒

9． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

10． 小心移取800微升上清液到新的15毫升锥形离心管

11． 加入xx毫升萃取液（Reagent D），混匀

12． 放进—20℃冰箱里，孵育2小时

13． 放进台式离心机离心10分钟，速度为10000g

14． 小心抽去上清液

15． 加入xx毫升萃取液（Reagent D）

16． 放进－20℃冰箱里过夜

17． 放进台式离心机离心10分钟，速度为10000g

18． 小心抽去上清液

19． 加入xx毫升清理液（Reagent B）

20． 放进－20℃冰箱里孵育30分钟

21． 放进台式离心机离心10分钟，速度为10000g

22． 小心抽去上清液

23． 空气中挥干

24． 若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里

25． 或继续进行后续操作，例如电泳，质谱等

注意事项

1． 本产品为20次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 试剂具有腐蚀性和挥发性，注意操作安全和密闭瓶盖

4． 推荐使用系列核糖体分离试剂盒提取核糖体

5． 本公司提供系列核糖体试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定无蛋白酶污染

3． 本产品经鉴定蛋白萃取产量高

4． 本产品经鉴定纯化程度高