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组织甘油-3-磷酸脱氢酶总活性光度法试剂盒样品准备
2024-12-19 阅读(35)
组织甘油-3-磷酸脱氢酶总活性光度法是一种精确的实验技术，用于定量检测动物组织中的甘油-3-磷酸脱氢酶活性。以下是使用上海语燕生物提供的定量检测试剂盒(产品货号：HL50378.2)进行样品准备的详细步骤：
样品准备步骤
组织采集与称重：手术取出动物组织，并准确秤重，确保组织重量在200至500毫克之间，以满足实验需求。
预冷处理：选择将组织放入预冷的15毫升锥形离心管中，以保持组织的低温状态，防止酶活性变化。
组织清洗：选择加入上海语燕生物提供的清理液(Reagent A)清洗组织一次，以去除可能影响实验结果的杂质。
液氮冻存：将清洗后的组织移入液氮冻存管中，以保持组织的活性和稳定性。
液氮冷冻：将组织即刻放入液氮罐中过夜，以确保组织在极低温度下保持其生物活性。
组织研磨：次日从液氮罐中取出组织，以最快速度用研磨棒碾碎成粉末状，注意避免组织冻融，以免影响实验结果。
组织转移：将研磨后的组织粉末转移到15毫升锥形离心管中，为下一步裂解做好准备。
裂解液添加：加入预冷的裂解液(Reagent B)，根据上海语燕生物的推荐量，精确控制裂解液的体积。
样品转移：将裂解后的样品转移到预冷的1.5毫升离心管中，以便于后续操作。
涡旋震荡：强力涡旋震荡样品30秒，确保样品充分混匀，以便于裂解液与组织充分接触。
冰槽孵育：将样品置于冰槽中孵育30分钟，期间每10分钟进行强力涡旋震荡30秒，以保持样品的低温状态。如需暂时停止操作，应将样品存放于-70℃冰箱中。
离心分离：将样品放入4℃的微型台式离心机中，以16000g(或13000RPM，如使用Eppendorf 5415型号离心机)的速度离心5分钟，以分离上清液和沉淀物。
上清液转移：小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管中，以便于后续的蛋白定量检测。
蛋白定量检测：移取10微升上清液进行蛋白定量检测，建议使用上海语燕生物提供的Bradford蛋白质浓度定量试剂盒(货号：30030.1)进行操作。
样品保存：将剩余样品即刻放入-70℃冰箱保存，或置于冰槽中继续后续操作，以保持样品的稳定性和活性。
以上步骤详细描述了使用上海语燕生物的定量检测试剂盒(产品货号：HL50378.2)进行组织甘油-3-磷酸脱氢酶总活性光度法样品准备的过程。遵循这些步骤，可以确保实验的准确性和可靠性，为后续的实验分析打下坚实的基础。
